背景技術(shù)：

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明至少部分地基于prame免疫原性肽和識(shí)別這類prame免疫原性肽的結(jié)合蛋白的發(fā)現(xiàn)，所述發(fā)現(xiàn)基于用于發(fā)現(xiàn)從患有與prame表達(dá)相關(guān)的病癥的受試者(例如，患有黑色素瘤、頭頸癌、肺癌、白血病(例如白血病亞型)、卵巢癌、腎細(xì)胞癌(rcc)、乳腺癌、宮頸癌或結(jié)腸癌、肉瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤的受試者)中鑒定的tcr克隆型的抗原的無(wú)偏功能篩選。在多種hla等位基因(例如，hla-a*02:01)的情況下，所鑒定的tcr識(shí)別prame免疫原性肽，例如表1中所列的那些免疫原性肽。本文證明prame在癌癥和睪丸組織中選擇性地表達(dá)，但在正常體細(xì)胞組織中不表達(dá)，從而使得它成為act的理想靶標(biāo)。prame結(jié)合蛋白(例如本文所述的tcr)結(jié)合prame免疫原性肽和引發(fā)殺傷表達(dá)prame的細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)的免疫反應(yīng)的能力證明這類結(jié)合蛋白在多種用途中的效用，包括診斷、預(yù)后、治療以prame表達(dá)為特征的病癥和篩選與所述病癥相關(guān)的劑的方法。

2、在一個(gè)方面，提供了一種免疫原性肽，所述免疫原性肽包含選自表1中所列的肽序列的肽表位。

3、在另一方面，提供了一種免疫原性肽，所述免疫原性肽由選自表1中所列的肽序列的肽表位組成。

4、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫原性肽源自prame蛋白，任選地其中所述免疫原性肽的長(zhǎng)度為8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、21個(gè)、22個(gè)、23個(gè)、24個(gè)或25個(gè)氨基酸。在另一實(shí)施方案中，免疫原性肽能夠在受試者中引發(fā)針對(duì)prame和/或表達(dá)prame的細(xì)胞的免疫反應(yīng)，任選地其中所述免疫反應(yīng)是i)t細(xì)胞反應(yīng)和/或cd8+?t細(xì)胞反應(yīng)和/或ii)選自由t細(xì)胞擴(kuò)增(例如增殖)、細(xì)胞因子釋放和/或細(xì)胞毒性殺傷組成的組。

5、在另一方面，提供了一種免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包含至少一種本文所述的免疫原性肽。

6、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫原性組合物還包含佐劑。在另一實(shí)施方案中，免疫原性組合物能夠在受試者中引發(fā)針對(duì)prame和/或表達(dá)prame的細(xì)胞的免疫反應(yīng)，任選地其中所述免疫反應(yīng)是i)t細(xì)胞反應(yīng)和/或cd8+?t細(xì)胞反應(yīng)和/或ii)選自由t細(xì)胞擴(kuò)增(例如增殖)、細(xì)胞因子釋放和/或細(xì)胞毒性殺傷組成的組。

7、在又一方面，提供了一種組合物，所述組合物包含選自表1中所列的肽序列的肽表位，和mhc分子。

8、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，mhc分子為mhc多聚體，任選地其中所述mhc多聚體為四聚體。在另一實(shí)施方案中，mhc分子為mhci類分子。在另一實(shí)施方案中，mhc分子包含mhcα鏈，所述鏈為選自由hla-a*02、hla-a*03、hla-a*01、hla-a*11、hla-a*24、hla-b*07、hla-c*07、hla-c*01、hla-c*02、hla-c*03、hla-c*04、hla-c*05、hla-c*06、hla-c*08、hla-c*12、hla-c*14、hla-c*15、hla-c*16、hla-c*17和hla-c*18組成的組的hla血清型，任選地其中hla等位基因選自由以下組成的組：hla-a*02:01、hla-a*02:02、hla-a*02:03、hla-a*02:04、hla-a*02:05、hla-a*02:06、hla-a*02:07、hla-a*02:10、hla-a*02:11、hla-a*02:12、hla-a*02:13、hla-a*02:14、hla-a*02:16、hla-a*02:17、hla-a*02:19、hla-a*02:20、hla-a*02:22、hla-a*02:24、hla-a*02:30、hla-a*02:42、hla-a*02:53、hla-a*02:60、hla-a*02:74等位基因、hla-a*03:01、hla-a*03:02、hla-a*03:05、hla-a*03:07、hla-a*01:01、hla-a*01:02、hla-a*01:03、hla-a*01:16等位基因、hla-a*11:01、hla-a*11:02、hla-a*11:03、hla-a*11:04、hla-a*11:05、hla-a*11:19等位基因、hla-a*24:02、hla-a*24:03、hla-a*24:05、hla-a*24:07、hla-a*24:08、hla-a*24:10、hla-a*24:14、hla-a*24:17、hla-a*24:20、hla-a*24:22、hla-a*24:25、hla-a*24:26、hla-a*24:58等位基因、hla-b*07:02、hla-b*07:04、hla-b*07:05、hla-b*07:09、hla-b*07:10、hla-b*07:15、hla-b*07:21、hla-c*07:02、hla-c*07:01、hla-c*04:01、hla-c*06:02、hla-c*03:04、hla-c*05:01、hla-c*16:01、hla-c*02:02、hla-c*03:03、hla-c*12:03、hla-c*08:02、hla-c*01:02、hla-c*17:01、hla-c*15:02、hla-c*14:02、hla-c*12:02、hla-c*07:04、hla-c*08:01、hla-c*03:02、hla-c*18:01、hla-c*15:05、hla-c*16:02、hla-c*08:04、hla-c*03:05和hla-c*14:03等位基因。在又一實(shí)施方案中，hla血清型是hla-a*02，例如hla-a*02:01。

9、在另一方面，提供了一種穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物，所述穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物包含在mhc分子背景中的本文所述的免疫原性肽。

10、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，mhc分子為mhc多聚體，任選地其中所述mhc多聚體為四聚體。在另一實(shí)施方案中，mhc分子為mhci類分子。在另一實(shí)施方案中，mhc分子包含mhcα鏈，所述鏈為選自由以下組成的組的hla血清型：hla-a*02:01、hla-a*02:02、hla-a*02:03、hla-a*02:04、hla-a*02:05、hla-a*02:06、hla-a*02:07、hla-a*02:10、hla-a*02:11、hla-a*02:12、hla-a*02:13、hla-a*02:14、hla-a*02:16、hla-a*02:17、hla-a*02:19、hla-a*02:20、hla-a*02:22、hla-a*02:24、hla-a*02:30、hla-a*02:42、hla-a*02:53、hla-a*02:60、hla-a*02:74等位基因、hla-a*03:01、hla-a*03:02、hla-a*03:05、hla-a*03:07、hla-a*01:01、hla-a*01:02、hla-a*01:03、hla-a*01:16等位基因、hla-a*11:01、hla-a*11:02、hla-a*11:03、hla-a*11:04、hla-a*11:05、hla-a*11:19等位基因、hla-a*24:02、hla-a*24:03、hla-a*24:05、hla-a*24:07、hla-a*24:08、hla-a*24:10、hla-a*24:14、hla-a*24:17、hla-a*24:20、hla-a*24:22、hla-a*24:25、hla-a*24:26、hla-a*24:58等位基因、hla-b*07:02、hla-b*07:04、hla-b*07:05、hla-b*07:09、hla-b*07:10、hla-b*07:15、hla-b*07:21、hla-c*07:02、hla-c*07:01、hla-c*04:01、hla-c*06:02、hla-c*03:04、hla-c*05:01、hla-c*16:01、hla-c*02:02、hla-c*03:03、hla-c*12:03、hla-c*08:02、hla-c*01:02、hla-c*17:01、hla-c*15:02、hla-c*14:02、hla-c*12:02、hla-c*07:04、hla-c*08:01、hla-c*03:02、hla-c*18:01、hla-c*15:05、hla-c*16:02、hla-c*08:04、hla-c*03:05和hla-c*14:03等位基因。在又一實(shí)施方案中，肽表位和mhc分子共價(jià)連接和/或其中mhc分子的α鏈和β鏈共價(jià)連接。在另一實(shí)施方案中，穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物包含可檢測(cè)標(biāo)記，任選地其中所述可檢測(cè)標(biāo)記為熒光團(tuán)。

11、在另一方面，提供了一種免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包含本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物和佐劑。

12、在又一方面，提供了一種分離的核酸，其編碼本文所述的免疫原性肽，或其補(bǔ)體。

13、在另一方面，提供了一種載體，所述載體包含本文所述的分離的核酸。

14、在另一方面，提供了一種細(xì)胞，所述細(xì)胞：a)包含本文所述的分離的核酸，b)包含本文所述的載體，和/或c)產(chǎn)生一種或多種本文所述的免疫原性肽和/或在細(xì)胞表面上呈遞一種或多種本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物，任選地其中所述細(xì)胞進(jìn)行基因工程化。

15、在又一方面，提供了一種裝置或試劑盒，所述裝置或試劑盒包含：a)一種或多種本文所述的免疫原性肽和/或b)一種或多種本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物，所述裝置或試劑盒任選地包含檢測(cè)a)和/或b)與結(jié)合蛋白的結(jié)合的試劑，任選地其中所述結(jié)合蛋白為抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、tcr、tcr的抗原結(jié)合片段、單鏈tcr(sctcr)、嵌合抗原受體(car)或包含tcr和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。

16、在另一方面，提供了一種檢測(cè)結(jié)合穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物的t細(xì)胞的方法，所述方法包括：a)使包含t細(xì)胞的樣品與本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物接觸；以及b)檢測(cè)t細(xì)胞與所述穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物的結(jié)合，任選地進(jìn)一步測(cè)定與所述穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物結(jié)合的穩(wěn)定mhc-肽特異性t細(xì)胞的百分率，任選地其中所述樣品包含外周血單個(gè)核細(xì)胞(pbmc)。

17、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞為cd8+?t細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，檢測(cè)和/或測(cè)定使用熒光激活細(xì)胞分選(facs)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)、放射免疫測(cè)定(ria)、免疫化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡法(westernblot)或細(xì)胞內(nèi)流式測(cè)定來(lái)執(zhí)行。在另一實(shí)施方案中，樣品包含接觸或懷疑接觸過(guò)一種或多種prame蛋白或其片段的t細(xì)胞。

18、在另一方面，提供了一種確定t細(xì)胞是否已暴露于prame的方法，所述方法包括：a)將包含t細(xì)胞的細(xì)胞群體與本文所述的免疫原性肽或本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物一起孵育；以及b)檢測(cè)反應(yīng)性的存在或水平，其中與對(duì)照水平相比存在反應(yīng)性或反應(yīng)性水平更高表明所述t細(xì)胞已暴露于prame，任選地其中所述包含t細(xì)胞的細(xì)胞群體從受試者獲得。

19、在又一方面，提供了一種用于預(yù)測(cè)罹患以prame表達(dá)為特征的病癥的受試者的臨床結(jié)果的方法，所述方法包括：a)測(cè)定從所述受試者獲得的t細(xì)胞與一種多種本文所述的免疫原性肽或一種或多種本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物之間的反應(yīng)性的存在或水平；以及b)將所述反應(yīng)性的存在或水平與來(lái)自對(duì)照物的反應(yīng)性進(jìn)行比較，其中所述對(duì)照物從具有良好臨床結(jié)果的受試者獲得，其中與對(duì)照物相比，受試者樣品中存在反應(yīng)性或反應(yīng)性水平更高表明受試者具有良好臨床結(jié)果。

20、在另一方面，提供了一種評(píng)估療法對(duì)以prame表達(dá)為特征的病癥的功效的方法，所述方法包括：a)在向受試者提供所述療法的至少一部分之前從受試者獲得的第一樣品中，測(cè)定從受試者獲得的t細(xì)胞與一種多種本文所述的免疫原性肽或一種或多種本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物之間的反應(yīng)性的存在或水平，以及b)測(cè)定一種多種本文所述的免疫原性肽或一種或多種本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物與從受試者獲得的t細(xì)胞之間的反應(yīng)性的存在或水平，所述t細(xì)胞存在于在向受試者提供所述療法之后從受試者獲得的第二樣品中，其中相對(duì)于第一樣品，第二樣品中存在反應(yīng)性或反應(yīng)性水平更高表明所述療法有效治療受試者的以prame表達(dá)為特征的病癥。

21、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)性水平由a)結(jié)合的存在和/或b)t細(xì)胞激活和/或效應(yīng)功能指示，任選地其中所述t細(xì)胞激活或效應(yīng)功能為t細(xì)胞增殖、殺傷或細(xì)胞因子釋放。在另一實(shí)施方案中，方法還包括在后續(xù)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)步驟a)和b)，任選地其中所述受試者已在第一時(shí)間點(diǎn)與后續(xù)時(shí)間點(diǎn)之間進(jìn)行治療以改善以prame表達(dá)為特征的病癥。在另一實(shí)施方案中，t細(xì)胞結(jié)合、激活和/或效應(yīng)功能使用熒光激活細(xì)胞分選(facs)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)、放射免疫測(cè)定(ria)、免疫化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡法或細(xì)胞內(nèi)流式測(cè)定來(lái)檢測(cè)。在又一實(shí)施方案中，對(duì)照水平為參考數(shù)字。在另一實(shí)施方案中，對(duì)照水平為未患以prame表達(dá)為特征的病癥的受試者的水平。

22、在另一方面，一種預(yù)防和/或治療受試者的以prame表達(dá)為特征的病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的本文所述的組合物。

23、在又一方面，提供了一種鑒定與選自表1中所列的肽序列的肽表位結(jié)合的肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包括：a)提供細(xì)胞，所述細(xì)胞在細(xì)胞表面上呈遞在mhc分子背景中的選自表1中所列的肽序列的肽表位；b)測(cè)定所述細(xì)胞上多種候選肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段與在mhc分子背景中的肽表位的結(jié)合；以及c)鑒定與在mhc分子背景中的肽表位結(jié)合的一種或多種肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段。

24、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟a)包括使細(xì)胞表面上的mhc分子與選自表1中所列的肽序列的肽表位接觸。在另一實(shí)施方案中，步驟a)包括在細(xì)胞中使用包含編碼所述肽表位的異源序列的載體來(lái)表達(dá)選自表1中所列的肽序列的肽表位。

25、在另一方面，提供了一種鑒定與選自表1中所列的肽序列的肽表位結(jié)合的肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包括：a)提供單獨(dú)或呈穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物的肽表位，其包含單獨(dú)或在mhc分子背景中的選自表1中所列的肽序列的肽表位；b)測(cè)定多種候選肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段與肽或穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物的結(jié)合；以及c)鑒定與肽表位或穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物結(jié)合的一種或多種肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段，任選地其中mhc或mhc-肽復(fù)合物如本文所述。

26、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，多種候選肽結(jié)合分子包含抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、tcr、tcr的抗原結(jié)合片段、單鏈tcr(sctcr)、嵌合抗原受體(car)或包含tcr和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。在另一實(shí)施方案中，多種候選肽結(jié)合分子包含至少2種、5種、10種、100種、103種、104種、105種、106種、107種、108種、109種或更多種不同的候選肽結(jié)合分子。在另一實(shí)施方案中，多種候選肽結(jié)合分子包含從來(lái)自受試者或受試者群體的樣品獲得的一種或多種候選肽結(jié)合分子；或多種候選肽結(jié)合分子包含一種或多種在從來(lái)自受試者的樣品獲得的親本支架肽結(jié)合分子中包含突變的候選肽結(jié)合分子。在又一實(shí)施方案中，受試者或受試者群體：a)未患以prame表達(dá)為特征的病癥和/或已經(jīng)從以prame表達(dá)為特征的病癥中恢復(fù)，或b)罹患以prame表達(dá)為特征的病癥。在另一實(shí)施方案中，已向受試者或受試者群體施用本文所述的組合物。在另一實(shí)施方案中，受試者為以prame表達(dá)為特征的病癥的動(dòng)物模型和/或哺乳動(dòng)物，任選地其中所述哺乳動(dòng)物為人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或嚙齒類動(dòng)物。在又一實(shí)施方案中，受試者為以prame表達(dá)為特征的病癥的動(dòng)物模型、hla轉(zhuǎn)基因小鼠和/或人tcr轉(zhuǎn)基因小鼠。在另一實(shí)施方案中，樣品包含外周血單個(gè)核細(xì)胞(pbmc)、t細(xì)胞和/或cd8+記憶t細(xì)胞。

27、在另一方面，提供了根據(jù)本文所述的方法鑒定的肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段，任選地其中所述肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段為抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、tcr、tcr的抗原結(jié)合片段、單鏈tcr(sctcr)、嵌合抗原受體(car)或包含tcr和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。

28、在又一方面，提供了一種治療受試者的以prame表達(dá)為特征的病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的進(jìn)行基因工程化的t細(xì)胞，所述t細(xì)胞表達(dá)肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段，所述肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段i)與選自表1中所列的序列的肽表位結(jié)合，ii)根據(jù)本文所述的方法鑒定，和/或iii)與包含在mhc分子背景中的選自表1中所列的序列的肽表位的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物結(jié)合，任選地其中所述肽結(jié)合分子或其抗原結(jié)合片段為抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、tcr、tcr的抗原結(jié)合片段、單鏈tcr(sctcr)、嵌合抗原受體(car)或包含tcr和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的融合蛋白，任選地其中mhc或mhc-肽復(fù)合物如本文所述。

29、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞從以下各者分離：a)受試者，b)未患以prame表達(dá)為特征的病癥的供體，或c)從以prame表達(dá)為特征的病癥中恢復(fù)的供體。

30、在另一方面，提供了一種治療受試者的以prame表達(dá)為特征的病癥的方法，所述方法包括向所述受試者輸注抗原特異性t細(xì)胞，其中所述抗原特異性t細(xì)胞通過(guò)以下方式產(chǎn)生：a)用本文所述的組合物刺激來(lái)自受試者的免疫細(xì)胞；以及b)在體外或離體擴(kuò)增抗原特異性t細(xì)胞，任選地i)在刺激所述免疫細(xì)胞之前從受試者分離免疫細(xì)胞和/或ii)其中免疫細(xì)胞包含pbmc、t細(xì)胞、cd8+?t細(xì)胞、初始t細(xì)胞、中央記憶t細(xì)胞和/或效應(yīng)記憶t細(xì)胞。

31、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，劑在適合肽表位、免疫原性肽、穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物、t細(xì)胞受體和/或免疫細(xì)胞之間形成至少一種免疫復(fù)合物的條件下和時(shí)間內(nèi)接觸放置。在另一實(shí)施方案中，肽表位、免疫原性肽、穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物和/或t細(xì)胞受體由細(xì)胞表達(dá)并且細(xì)胞在一個(gè)或多個(gè)步驟期間擴(kuò)增和/或分離。在另一實(shí)施方案中，以prame表達(dá)為特征的病癥為癌癥或其復(fù)發(fā)，任選地其中所述癌癥選自由以下組成的組：黑色素瘤、頭頸癌、肺癌、白血病(例如白血病亞型)、卵巢癌、腎細(xì)胞癌(rcc)、乳腺癌、宮頸癌或結(jié)腸癌、肉瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤。在又一實(shí)施方案中，受試者為以prame表達(dá)為特征的病癥的動(dòng)物模型和/或哺乳動(dòng)物，任選地其中所述哺乳動(dòng)物為人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或嚙齒類動(dòng)物。

32、在另一方面，提供了一種結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白結(jié)合包含本文所述的免疫原性肽序列的多肽、本文所述的免疫原性肽和/或本文所述的穩(wěn)定mhc-肽復(fù)合物，任選地其中所述結(jié)合蛋白為抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、tcr、tcr的抗原結(jié)合片段、單鏈tcr(sctcr)、嵌合抗原受體(car)或包含tcr和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。

33、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含：a)t細(xì)胞受體(tcr)α鏈cdr序列，其與選自由表2中所列的tcrα鏈cdr序列組成的組的tcrα鏈cdr序列具有至少約80％同一性；和/或b)tcrβ鏈cdr序列，其與選自由表2中所列的tcrβ鏈cdr序列組成的組的tcrβ鏈cdr序列具有至少約80％同一性，其中所述結(jié)合蛋白能夠與prame免疫原性肽-mhc(pmhc)復(fù)合物結(jié)合，任選地其中結(jié)合親和力具有小于或等于約5×10-4m的kd。在另一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含：a)tcrα鏈可變(vα)結(jié)構(gòu)域序列，其與選自由表2中所列的tcr?vα結(jié)構(gòu)域序列組成的組的tcr?vα結(jié)構(gòu)域序列具有至少約80％同一性；和/或b)tcrβ鏈可變(vβ)結(jié)構(gòu)域序列，其與選自由表2中所列的tcr?vβ結(jié)構(gòu)域序列組成的組的tcrvβ結(jié)構(gòu)域序列具有至少約80％同一性，其中所述結(jié)合蛋白能夠與prame免疫原性肽-mhc(pmhc)復(fù)合物結(jié)合，任選地其中結(jié)合親和力具有小于或等于約5×10-4m的kd。在另一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含：a)tcrα鏈序列，其與選自由表2中所列的tcrα鏈序列組成的組的tcrα鏈序列具有至少約80％同一性；和/或b)tcrβ鏈序列，其與選自由表2中所列的tcrβ鏈序列組成的組的tcrβ鏈序列具有至少約80％同一性，其中所述結(jié)合蛋白能夠與prame免疫原性肽-mhc(pmhc)復(fù)合物結(jié)合，任選地其中結(jié)合親和力具有小于或等于約5×10-4m的kd。在又一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含：a)tcrα鏈cdr序列，其選自由表2中所列的tcrα鏈cdr序列組成的組；和/或b)tcrβ鏈cdr序列，其選自由表2中所列的tcrβ鏈cdr序列組成的組，其中所述結(jié)合蛋白能夠與prame免疫原性肽-mhc(pmhc)復(fù)合物結(jié)合，任選地其中結(jié)合親和力具有小于或等于約5×10-4m的kd。在又一實(shí)施方案中，提供一種結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白包含：a)tcrα鏈可變(vα)結(jié)構(gòu)域序列，其選自由表2中所列的tcr?vα結(jié)構(gòu)域序列組成的組；和/或b)tcrβ鏈可變(vβ)結(jié)構(gòu)域序列，其選自由表2中所列的tcr?vβ結(jié)構(gòu)域序列組成的組，其中所述結(jié)合蛋白能夠與prame免疫原性肽-mhc(pmhc)復(fù)合物結(jié)合，任選地其中結(jié)合親和力具有小于或等于約5×10-4m的kd。在另一實(shí)施方案中，提供一種結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白包含：a)tcrα鏈序列，其選自由表2中所列的tcrα鏈序列組成的組；和/或b)tcrβ鏈序列，其選自由表2中所列的tcrβ鏈序列組成的組，其中所述結(jié)合蛋白能夠與prame免疫原性肽-mhc(pmhc)復(fù)合物結(jié)合，任選地其中結(jié)合親和力具有小于或等于約5×10-4m的kd。在另一實(shí)施方案中，1)tcrα鏈cdr、tcrvα結(jié)構(gòu)域和/或tcrα鏈由選自表2中所列的trav、traj和trac基因的組的trav、traj和/或trac基因或它們的片段編碼，和/或2)tcrβ鏈cdr、tcr?vβ結(jié)構(gòu)域和/或tcrβ鏈由選自表2中所列的trbv、trbj和trbc基因的組的trbv、trbj和/或trbc基因或它們的片段編碼，和/或3)與表2中所列的同源參考cdr序列相比，所述結(jié)合蛋白的每個(gè)cdr具有至多五個(gè)氨基酸取代、插入、缺失或它們的組合。在另一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白為嵌合、人源化或人類的。在又一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含具有跨膜結(jié)構(gòu)域的結(jié)合結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方案中，tcrα鏈和tcrβ鏈共價(jià)連接，任選地其中tcrα鏈和tcrβ鏈透過(guò)連接肽共價(jià)連接。在另一實(shí)施方案中，tcrα鏈和/或tcrβ鏈共價(jià)連接到部分，任選地其中共價(jià)連接的部分包含親和標(biāo)簽或標(biāo)記。在又一實(shí)施方案中，親和標(biāo)簽選自由以下組成的組：cd34富集標(biāo)簽、谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶(gst)、鈣調(diào)蛋白結(jié)合蛋白(cbp)、蛋白c標(biāo)簽、myc標(biāo)簽、halotag、ha標(biāo)簽、flag標(biāo)簽、his標(biāo)簽、生物素標(biāo)簽和v5標(biāo)簽，和/或其中標(biāo)記為熒光蛋白。在另一實(shí)施方案中，共價(jià)連接的部分選自由以下組成的組：致炎因子、細(xì)胞因子、毒素、細(xì)胞毒性分子、放射性同位素、或抗體或其抗原結(jié)合片段。在另一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白與細(xì)胞表面上的pmhc復(fù)合物結(jié)合。在又一實(shí)施方案中，mhc或mhc-肽復(fù)合物如本文所述。在另一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白與prame肽-mhc(pmhc)復(fù)合物的結(jié)合引發(fā)免疫反應(yīng)，任選地其中所述免疫反應(yīng)是i)t細(xì)胞反應(yīng)和/或cd8+?t細(xì)胞反應(yīng)和/或ii)選自由t細(xì)胞擴(kuò)增、細(xì)胞因子釋放和/或細(xì)胞毒性殺傷組成的組。在另一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白能夠以小于或等于約1×10-4m、小于或等于約5×10-5m、小于或等于約1×10-5m、小于或等于約5×10-6m、小于或等于約1×10-6m、小于或等于約5×10-7m、小于或等于約1×10-7m、小于或等于約5×10-8m、小于或等于約1×10-8m、小于或等于約5×10-9m、小于或等于約1×10-9m、小于或等于約5×10-10m、小于或等于約1×10-10m、小于或等于約5×10-11m、小于或等于約1×10-11m、小于或等于約5×10-12m或小于或等于約1×10-12m的kd與prame免疫原性肽-mhc(pmhc)復(fù)合物特異性和/或選擇性地結(jié)合。在又一實(shí)施方案中，與已知的t細(xì)胞受體相比，結(jié)合蛋白對(duì)肽-mhc(pmhc)具有更高結(jié)合親和力，任選地其中更高結(jié)合親和力至少高出1.05倍。在另一實(shí)施方案中，當(dāng)與具有prame雜合表達(dá)的靶細(xì)胞接觸時(shí)，與已知的t細(xì)胞受體相比，結(jié)合蛋白誘導(dǎo)更高的t細(xì)胞擴(kuò)增、細(xì)胞因子釋放和/或細(xì)胞毒性殺傷，任選地其中誘導(dǎo)至少高出1.05倍。如本文所用，在一些實(shí)施方案中，對(duì)倍數(shù)變化的提及可與任何感興趣的參考模式進(jìn)行比較，例如與不同結(jié)合蛋白進(jìn)行比較；與不同背景下的相同結(jié)合蛋白進(jìn)行比較，如與本文所述的其它劑組合，相同結(jié)合蛋白在不同免疫細(xì)胞中以不同水平表達(dá)；諸如此類。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞毒性殺傷針對(duì)靶癌細(xì)胞。在又一實(shí)施方案中，癌癥選自由以下組成的組：黑色素瘤、頭頸癌、肺癌、白血病(例如白血病亞型)、卵巢癌、腎細(xì)胞癌(rcc)、乳腺癌、宮頸癌或結(jié)腸癌、肉瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤。在另一實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白不與包含pla2g4e、efna1和/或slc26a1肽表位的肽-mhc(pmhc)復(fù)合物結(jié)合。這些基因是眾所周知的并且本領(lǐng)域中公認(rèn)根據(jù)以下ncbi基因id編號(hào)進(jìn)行注釋，每個(gè)編號(hào)均可在萬(wàn)維網(wǎng)上ncbi.nlm.nih.gov/gene獲得：pla2g4e：基因id?123745；efna1：基因id?1942；以及slc26a1：基因id?10861。

34、在又一方面，提供了一種tcrα鏈和/或β鏈，所述tcrα鏈和/或β鏈選自由表2中所列的tcrα鏈和β鏈序列組成的組。

35、在另一方面，提供了一種分離的核酸分子，所述分離的核酸分子：i)在嚴(yán)格條件下與編碼選自由表2中所列的多肽序列組成的組的多肽的核酸的補(bǔ)體雜交，ii)序列與編碼選自由表2中所列的多肽序列組成的組的多肽的核酸具有至少約80％同源性，和/或iii)ii)序列與編碼表2中所列的核酸具有至少約80％同源性，任選地其中所述分離的核酸分子包含1)選自表2中所列的trav、traj和trac基因的組的trav、traj和/或trac基因或它們的片段和/或2)選自表2中所列的trbv、trbj和trbc基因的組的trbv、trbj和/或trbc基因或它們的片段。

36、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸進(jìn)行密碼子優(yōu)化以在宿主細(xì)胞中表達(dá)。

37、在另一方面，提供了一種載體，所述載體包含本文所述的分離的核酸，任選地其中i)載體為克隆載體、表達(dá)載體或病毒載體和/或ii)載體包含表3中所列的載體序列。

38、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，載體還包含編碼cd8α、cd8β、顯性負(fù)性tgfβ受體ii(dn-tgfβrii)、選擇性蛋白標(biāo)志物的核酸序列，任選地其中所述選擇性蛋白標(biāo)志物為二氫葉酸還原酶(dhfr)。在另一實(shí)施方案中，編碼cd8α、cd8β、dn-tgfβrii和/或選擇性蛋白標(biāo)志物的核酸序列可操作地連接到編碼標(biāo)簽的核酸。在另一實(shí)施方案中，編碼標(biāo)簽的核酸處于編碼cd8α、cd8β、dn-tgfβrii和/或選擇性蛋白的核酸序列上游的5’，使得所述標(biāo)簽與cd8α、cd8β、dn-tgfβrii和/或選擇性蛋白標(biāo)志物的n端融合。在又一實(shí)施方案中，標(biāo)簽為cd34富集標(biāo)簽。在另一實(shí)施方案中，單獨(dú)或與編碼cd8α、cd8β、dn-tgfβrii和/或選擇性蛋白標(biāo)志物的核酸序列組合的本文所述的分離的核酸與內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)或編碼自裂解肽的核酸序列相互連接。在另一實(shí)施方案中，自裂解肽為p2a、e2a、f2a或t2a。

39、在又一方面，提供了一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含本文所述的分離的核酸，包含本文所述的載體，和/或表達(dá)本文所述的結(jié)合蛋白，任選地其中所述細(xì)胞進(jìn)行基因工程化。

40、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞包含tcr基因、hla基因或兩者的染色體基因敲除。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞包含選自以下的hla基因的敲除：α1巨球蛋白基因、α2巨球蛋白基因、α3巨球蛋白基因、β1微球蛋白基因、β2微球蛋白基因和它們的組合。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞包含選自以下的tcr基因的敲除：tcrα可變區(qū)基因、tcrβ可變區(qū)基因、tcr恒定區(qū)基因和它們的組合。在又一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞表達(dá)cd8α、cd8β、dn-tgfβrii和/或選擇性蛋白標(biāo)志物，任選地其中所述選擇性蛋白標(biāo)志物為dhfr，并且進(jìn)一步任選地其中cd8α、cd8β、dn-tgfβrii和/或選擇性蛋白標(biāo)志物與cd34富集標(biāo)簽融合。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞使用cd34富集標(biāo)簽進(jìn)行富集。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞為造血祖細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞(pbmc)、臍帶血細(xì)胞或免疫細(xì)胞。在又一實(shí)施方案中，免疫細(xì)胞為t細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞前體細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞祖細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞干細(xì)胞、cd4+?t細(xì)胞、cd8+?t細(xì)胞、cd4/cd8雙陰性t細(xì)胞、γδ(gammadelta)t細(xì)胞、自然殺傷(nk)細(xì)胞、nk-t細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞或它們的組合。在又一實(shí)施方案中，t細(xì)胞為初始t細(xì)胞、中央記憶t細(xì)胞、效應(yīng)記憶t細(xì)胞或它們的組合。在另一實(shí)施方案中，t細(xì)胞為原代t細(xì)胞或t細(xì)胞系的細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，t細(xì)胞不表達(dá)內(nèi)源性tcr或具有內(nèi)源性tcr的較低表面表達(dá)。在又一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞在與包含肽-mhc(pmhc)復(fù)合物的靶細(xì)胞接觸時(shí)能夠產(chǎn)生細(xì)胞因子或細(xì)胞毒性分子，所述肽-mhc(pmhc)復(fù)合物包含在mhc分子背景中的prame肽表位。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞在體外、離體或體內(nèi)與靶細(xì)胞接觸。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞因子為tnf-α、il-2和/或ifn-γ。在又一實(shí)施方案中，細(xì)胞毒性分子為穿孔素和/或顆粒酶，任選地其中細(xì)胞毒性分子為顆粒酶b。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞在與具有prame雜合表達(dá)的靶細(xì)胞接觸時(shí)能夠產(chǎn)生更高水平的細(xì)胞因子或細(xì)胞毒性分子。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞能夠產(chǎn)生至少高出1.05倍水平的細(xì)胞因子或細(xì)胞毒性分子。在又一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞能夠殺傷包含肽-mhc(pmhc)復(fù)合物的靶細(xì)胞，所述肽-mhc(pmhc)復(fù)合物包含在mhc分子背景中的prame肽表位。在另一實(shí)施方案中，殺傷通過(guò)殺傷測(cè)定來(lái)測(cè)定。在另一實(shí)施方案中，殺傷測(cè)定中宿主細(xì)胞與靶細(xì)胞的比率為20:1至1:4。在又一實(shí)施方案中，靶細(xì)胞為用1μg/ml至50pg/ml?prame肽進(jìn)行脈沖輸送的靶細(xì)胞，任選地其中靶細(xì)胞為與prame肽匹配的mhc的單等位基因細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞在與具有prame雜合表達(dá)的靶細(xì)胞接觸時(shí)能夠殺傷更高數(shù)目的靶細(xì)胞，任選地其中細(xì)胞殺傷至少高出1.05倍。在另一實(shí)施方案中，靶細(xì)胞為細(xì)胞系(例如hs695t、a375或nci-h1563)或原代細(xì)胞，任選地其中靶細(xì)胞選自由以下組成的組：hek293來(lái)源的細(xì)胞系、癌細(xì)胞系、原代癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系和永生化細(xì)胞系。在又一實(shí)施方案中，prame免疫原性肽如本文所述和/或其中mhc或mhc-肽復(fù)合物如本文所述。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞在與包含肽-mhc(pmhc)復(fù)合物的靶細(xì)胞接觸時(shí)不誘導(dǎo)t細(xì)胞擴(kuò)增、細(xì)胞因子釋放或細(xì)胞毒性殺傷，所述肽-mhc(pmhc)復(fù)合物包含pla2g4e、efna1和/或slc26a1肽表位。在另一實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞不表達(dá)prame抗原，未被本文所述的結(jié)合蛋白識(shí)別，不屬于血清型hla-a*02，和/或不表達(dá)hla-a*02等位基因。

41、在另一方面，提供了本文所述的宿主細(xì)胞的群體。

42、在另一方面，提供了一種組合物，所述組合物包含a)本文所述的結(jié)合蛋白、b)本文所述的分離的核酸、c)本文所述的載體、d)本文所述的宿主細(xì)胞和/或e)本文所述的宿主細(xì)胞的群體，和載劑。

43、在又一方面，提供了一種裝置或試劑盒，所述裝置或試劑盒包含a)本文所述的結(jié)合蛋白、b)本文所述的分離的核酸、c)本文所述的載體、d)本文所述的宿主細(xì)胞和/或e)本文所述的宿主細(xì)胞的群體，所述裝置或試劑盒任選地包含檢測(cè)a)、d)和/或e)與pmhc復(fù)合物的結(jié)合的試劑。

44、在另一方面，提供了一種產(chǎn)生本文所述的結(jié)合蛋白的方法，其中所述方法包括以下步驟：(i)在適合允許所述結(jié)合蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)如下核酸轉(zhuǎn)化，所述核酸包含編碼本文所述的結(jié)合蛋白的序列；以及(ii)回收所表達(dá)的結(jié)合蛋白。

45、在另一方面，提供了一種產(chǎn)生表達(dá)本文所述的結(jié)合蛋白的宿主細(xì)胞的方法，其中所述方法包括以下步驟：(i)將如下核酸引入宿主細(xì)胞中，所述核酸包含編碼本文所述的結(jié)合蛋白的序列；以及(ii)在適合允許所述結(jié)合蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。

46、在又一方面，提供了一種檢測(cè)prame抗原和/或表達(dá)prame的細(xì)胞的存在或不存在的方法，任選地其中所述細(xì)胞為過(guò)度增殖細(xì)胞，所述方法包括通過(guò)使用至少一種本文所述的結(jié)合蛋白、至少一種本文所述的宿主細(xì)胞或本文所述的宿主細(xì)胞的群體來(lái)檢測(cè)樣品中所述prame抗原的存在或不存在，其中檢測(cè)到prame抗原表明存在prame抗原和/或表達(dá)prame的細(xì)胞。

47、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種結(jié)合蛋白或至少一種宿主細(xì)胞與在mhc分子背景中的prame肽形成復(fù)合物，并且以熒光激活細(xì)胞分選(facs)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)、放射免疫測(cè)定(ria)、免疫化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡法或細(xì)胞內(nèi)流式測(cè)定的形式檢測(cè)復(fù)合物。在另一實(shí)施方案中，方法還包括從受試者獲得樣品。

48、在另一方面，提供了一種檢測(cè)受試者中以prame表達(dá)為特征的病癥的程度的方法，所述方法包括：a)使從受試者獲得的樣品與至少一種本文所述的結(jié)合蛋白、至少一種本文所述的宿主細(xì)胞或本文所述的宿主細(xì)胞的群體接觸；以及b)檢測(cè)反應(yīng)性水平，其中與對(duì)照水平相比存在反應(yīng)性或反應(yīng)性水平更高表明受試者中以prame表達(dá)為特征的病癥的程度。

49、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)照水平為參考數(shù)字。在另一實(shí)施方案中，對(duì)照水平為來(lái)自未患以prame表達(dá)為特征的病癥的受試者的水平。

50、在另一方面，提供了一種用于監(jiān)測(cè)受試者中以prame表達(dá)為特征的病癥的進(jìn)展的方法，所述方法包括：a)檢測(cè)受試者樣品中從所述受試者獲得的樣品與至少一種本文所述的結(jié)合蛋白、至少一種本文所述的宿主細(xì)胞或本文所述的宿主細(xì)胞的群體之間的反應(yīng)性的存在或水平；b)在后續(xù)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)步驟a)；以及c)比較在步驟a)和b)中檢測(cè)到的prame水平或表達(dá)prame的感興趣細(xì)胞以監(jiān)測(cè)受試者中以prame表達(dá)為特征的病癥的進(jìn)展，其中與步驟a)相比，步驟b)中檢測(cè)到的prame水平或表達(dá)prame的感興趣細(xì)胞的不存在或降低表明受試者中以prame表達(dá)為特征的病癥的進(jìn)展受到抑制，并且與步驟a)相比，步驟b)中檢測(cè)到的prame水平或表達(dá)prame的感興趣細(xì)胞的存在或增加表明受試者中以prame表達(dá)為特征的病癥發(fā)生進(jìn)展。

51、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者已在第一時(shí)間點(diǎn)與后續(xù)時(shí)間點(diǎn)之間進(jìn)行治療以治療以prame表達(dá)為特征的病癥。

52、在又一方面，提供了一種用于預(yù)測(cè)罹患以prame表達(dá)為特征的病癥的受試者的臨床結(jié)果的方法，所述方法包括：a)測(cè)定從所述受試者獲得的樣品與至少一種本文所述的結(jié)合蛋白、至少一種本文所述的宿主細(xì)胞或本文所述的宿主細(xì)胞的群體之間的反應(yīng)性的存在或水平；以及b)將反應(yīng)性的存在或水平與來(lái)自對(duì)照物的反應(yīng)性進(jìn)行比較，其中所述對(duì)照物從具有良好臨床結(jié)果的受試者獲得；其中與對(duì)照物相比，受試者樣品中不存在反應(yīng)性或反應(yīng)性水平降低表明受試者具有良好臨床結(jié)果。

53、在另一方面，提供了一種評(píng)估療法對(duì)以prame表達(dá)為特征的病癥的功效的方法，所述方法包括：a)在針對(duì)以prame表達(dá)為特征的病癥向所述受試者提供所述療法的至少一部分之前從所述受試者獲得的第一樣品中，測(cè)定從受試者獲得的樣品與至少一種本文所述的結(jié)合蛋白、至少一種本文所述的宿主細(xì)胞或本文所述的宿主細(xì)胞的群體之間的反應(yīng)性的存在或水平，以及b)在針對(duì)以prame表達(dá)為特征的病癥提供所述療法之后從受試者獲得的第二樣品中，測(cè)定從受試者獲得的樣品與至少一種本文所述的結(jié)合蛋白、至少一種本文所述的宿主細(xì)胞或本文所述的宿主細(xì)胞的群體之間的反應(yīng)性的存在或水平，其中相對(duì)于第一樣品，第二樣品中不存在反應(yīng)性或反應(yīng)性水平降低表明所述療法有效治療受試者的以prame表達(dá)為特征的病癥，并且其中相對(duì)于第一樣品，第二樣品中存在反應(yīng)性或反應(yīng)性水平增加表明所述療法未有效治療受試者的以prame表達(dá)為特征的病癥。

54、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)性水平由a)結(jié)合的存在和/或b)t細(xì)胞激活和/或效應(yīng)功能指示，任選地其中所述t細(xì)胞激活或效應(yīng)功能為t細(xì)胞增殖、殺傷或細(xì)胞因子釋放。在另一實(shí)施方案中，t細(xì)胞結(jié)合、激活和/或效應(yīng)功能使用熒光激活細(xì)胞分選(facs)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)、放射免疫測(cè)定(ria)、免疫化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡法或細(xì)胞內(nèi)流式測(cè)定來(lái)檢測(cè)。

55、在另一方面，提供了一種預(yù)防和/或治療以prame表達(dá)為特征的病癥的方法，所述方法包括使表達(dá)prame的靶細(xì)胞與治療有效量的組合物接觸，所述組合物包含表達(dá)至少一種本文所述的結(jié)合蛋白的細(xì)胞，任選地其中所述組合物施用于受試者。

56、還提供了多個(gè)實(shí)施方案，其可應(yīng)用于本發(fā)明涵蓋的任何方面和/或與本文所述的任何其它實(shí)施方案組合。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞為同種異體細(xì)胞、同基因型細(xì)胞或自體細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞為本文所述的宿主細(xì)胞或本文所述的宿主細(xì)胞的群體。在另一實(shí)施方案中，靶細(xì)胞為表達(dá)prame的癌細(xì)胞。在又一實(shí)施方案中，細(xì)胞組合物還包含藥學(xué)上可接受的載劑。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞組合物在受試者中誘導(dǎo)針對(duì)表達(dá)prame的靶細(xì)胞的免疫反應(yīng)。在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞組合物在受試者中誘導(dǎo)針對(duì)表達(dá)prame的靶細(xì)胞的抗原特異性t細(xì)胞免疫反應(yīng)。在又一實(shí)施方案中，抗原特異性t細(xì)胞免疫反應(yīng)包含cd4+輔助t淋巴細(xì)胞(th)反應(yīng)和cd8+細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞(ctl)反應(yīng)中的至少一者。在另一實(shí)施方案中，方法還包括施用至少一種針對(duì)以prame表達(dá)為特征的病癥的另外的治療，任選地其中所述至少一種針對(duì)以prame表達(dá)為特征的病癥的另外的治療與組合物同時(shí)或依次施用。在另一實(shí)施方案中，以prame表達(dá)為特征的病癥為癌癥或其復(fù)發(fā)，任選地其中所述癌癥選自由以下組成的組：黑色素瘤、頭頸癌、肺癌、白血病(例如白血病亞型)、卵巢癌、腎細(xì)胞癌(rcc)、乳腺癌、宮頸癌或結(jié)腸癌、肉瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤。在又一實(shí)施方案中，受試者為以prame表達(dá)為特征的病癥的動(dòng)物模型和/或哺乳動(dòng)物，任選地其中所述哺乳動(dòng)物為人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或嚙齒類動(dòng)物。