本發(fā)明涉及植保生物農(nóng)藥領(lǐng)域，涉及貝萊斯芽孢桿菌tcs001作為活性成分應(yīng)用于防治水稻稻瘟病菌，涉及貝萊斯芽孢桿菌tcs001的脂肽類粗提物對(duì)水稻稻瘟病菌的抑菌作用，還涉及貝萊斯芽孢桿菌tcs001和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物激活水稻抵抗稻瘟病菌的作用。

背景技術(shù)：

1、全球約有一半的人口將大米做為主食，而水稻在種植的過程中常受到昆蟲和病原菌的危害。由真菌magnaporthe?oryzae引起的稻瘟病是最常見的水稻病害之一，會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的產(chǎn)量損失。目前主要的防治方法包括抗性品種篩選和應(yīng)用化學(xué)殺菌劑。然而，田間環(huán)境復(fù)雜，單一抗性品種難以面對(duì)多種病原菌直接或間接侵染；此外，由于化學(xué)殺菌劑的長期大量使用，不僅會(huì)加劇病原菌產(chǎn)生耐藥性，藥劑殘留導(dǎo)致的土壤微生物數(shù)量減少、肥力下降對(duì)生態(tài)環(huán)境造成威脅。因此，開發(fā)高效、安全、綠色的替代品尤為迫切。

2、貝萊斯芽孢桿菌(bacillusvelezensis)是一種新型生防細(xì)菌，能合成大量具有強(qiáng)抑菌活性的脂肽類物質(zhì)。貝萊斯芽孢桿菌分布地區(qū)廣泛，可在干旱、鹽漬等逆境下存活，相關(guān)產(chǎn)品甚少，開發(fā)前景廣闊。

3、本技術(shù)應(yīng)用的貝萊斯芽孢桿菌tcs001(bacillus?velezensis?tcs001)分離自渤海淤泥，原始菌株為海洋芽孢桿菌(bacillus?sp.)ct2628，經(jīng)誘變穩(wěn)定后鑒定并命名為貝萊斯芽孢桿菌tcs001(bacillus?velezensis?tcs001)，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(cgmcc)，保藏編號(hào)為cgmcc?no.8921，首次公布于專利zl201410168402.2。本技術(shù)發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)，雖然貝萊斯芽孢桿菌tcs001對(duì)黃瓜灰霉病菌、黃瓜蔓枯病菌、油菜菌核病菌、黃瓜褐斑病菌、棉花枯萎病菌及香蕉葉斑病菌有一定的抑制效果。但是，貝萊斯芽孢桿菌tcs001對(duì)不同的植物病原菌抑制效果卻存在顯著性差異，本技術(shù)首次研究貝萊斯芽孢桿菌tcs001、貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液對(duì)水稻稻瘟病菌的抑菌效果。

4、本技術(shù)發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)，貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液(不含菌體本身，僅含有其次生代謝產(chǎn)物)對(duì)多種植物病原真菌具有較高的抑菌活性，推測(cè)貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵可能產(chǎn)生多種具有抑菌活性的次生代謝產(chǎn)物(參考已提交申請(qǐng)的發(fā)明專利：一種從貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液中分離包含脂肽類化合物的混合物及其應(yīng)用，申請(qǐng)?zhí)枺篶n202311517534.7)。本技術(shù)首次研究貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物對(duì)水稻稻瘟病菌的抑菌效果。

5、本領(lǐng)域已知，貝萊斯芽孢桿菌種類眾多，暫無具體統(tǒng)計(jì)數(shù)量，但具有誘導(dǎo)植物抗性且具有抗逆、促生作用的貝萊斯芽孢桿菌報(bào)道較少。本技術(shù)首次研究貝萊斯芽孢桿菌tcs001、貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物激活水稻對(duì)稻瘟病菌的抗性效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物用于對(duì)稻瘟病菌進(jìn)行生物防治的用途，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001保藏編號(hào)為cgmccno.8921。為水稻稻瘟病菌的防治提供一種新的生物藥劑。

2、本發(fā)明的另一目的在于提供貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物在拮抗稻瘟病菌方面的用途，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001保藏編號(hào)為cgmccno.8921，其特征在于，所述拮抗稻瘟病菌為拮抗稻瘟病菌附著胞的形成，和/或抑制稻瘟病菌菌絲的生長發(fā)育，和/或降低稻瘟病菌致病力。

3、本發(fā)明的目的在于提供貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物在制備防治稻瘟病農(nóng)藥中的用途，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001保藏編號(hào)為cgmcc?no.8921。

4、優(yōu)選的，所述稻瘟病為苗稻瘟、葉瘟、葉枕瘟、節(jié)稻瘟、穗頸瘟、枝梗瘟或谷粒瘟等中的一種或幾種。

5、本發(fā)明的目的在于提供貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物誘導(dǎo)水稻抵抗稻瘟病菌的用途，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001保藏編號(hào)為cgmcc?no.8921。

6、本發(fā)明的目的在于提供貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物在制備誘導(dǎo)水稻抵抗稻瘟病的藥物中的用途，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001保藏編號(hào)為cgmccno.8921。

7、優(yōu)選的，所述用途為激活水稻抗性響應(yīng)蛋白。

8、優(yōu)選的，所述用途為提高水稻抗性免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平。

9、優(yōu)選的，所述水稻抗性免疫相關(guān)基因?yàn)閛sks4，osnac4，ospr1a，oschitinase1等中的一種或幾種。

10、優(yōu)選的，所述用途為激活水稻活性氧積累。

11、優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物的濃度為10mg/l-500mg/l。

12、優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物的濃度為10mg/l-200mg/l。

13、本發(fā)明的目的在于提供一種防治稻瘟病菌的方法，包括使用貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物處理的步驟，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001保藏編號(hào)為cgmccno.8921。

14、優(yōu)選的，所述處理的步驟為接觸處理。

15、本發(fā)明的目的在于提供一種防治稻瘟病的方法，包括將貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物施用于水稻作物，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001保藏編號(hào)為cgmccno.8921。

16、本發(fā)明的另一目的在于提供貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物對(duì)水稻稻瘟病菌具有顯著抑菌作用的用途。

17、優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物的濃度為10mg/l-100mg/l。

18、本發(fā)明的另一目的在于提供貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物能夠激活水稻抵抗水稻稻瘟病菌的用途。

19、優(yōu)選的，所述貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物的濃度為100mg/l-200mg/l。

20、優(yōu)選的，本發(fā)明所述的貝萊斯芽孢桿菌tcs001菌株如實(shí)施例1所述，采用平板劃線法，將貝萊斯芽孢桿菌菌株tcs001劃線接種在lb固體培養(yǎng)基上，在28℃細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，得到貝萊斯芽孢桿菌tcs001單菌落。

21、優(yōu)選的，本發(fā)明所述的貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液如實(shí)施例1所述，將貝萊斯芽孢桿菌tcs001種子液接種到貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃、173rpm搖床培養(yǎng)72h，制得貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液。

22、優(yōu)選的，本發(fā)明所述的貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液如實(shí)施例1所述，將制得的貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液在4℃條件下、以8000rpm離心10min，完成后，取發(fā)酵上清液用0.22μm濾膜過濾3次，制成貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液。

23、優(yōu)選的，本發(fā)明所述的貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物如實(shí)施例2所述，將貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵液置于4℃條件下，以8000rpm離心10min，收集上清液用0.22μm濾膜過濾3次，得到無菌發(fā)酵濾液；接著用6mol/l的鹽酸調(diào)節(jié)上清液的ph值至2.0，靜置過夜；之后再次將酸沉淀后的溶液在4℃條件下、8000rpm離心10min，棄去上清液，保留沉淀，最后用烘干燈將沉淀烤干，所得即為貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物。

24、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：

25、本發(fā)明通過對(duì)峙實(shí)驗(yàn)，首次發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌tcs001對(duì)水稻稻瘟病菌具有顯著的抑菌效果，抑菌效果為96.7％。

26、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液對(duì)水稻稻瘟病菌具有顯著的抑菌效果。

27、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物對(duì)水稻稻瘟病具有顯著的抑菌效果。

28、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌tcs001能夠激活水稻免疫反應(yīng)，抵抗水稻稻瘟病菌侵染。

29、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌tcs001發(fā)酵濾液能夠激活水稻免疫反應(yīng)，抵抗水稻稻瘟病菌侵染。

30、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物能夠激活水稻免疫反應(yīng)，抵抗水稻稻瘟病菌侵染。

31、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌tcs001菌株制備的發(fā)酵液誘導(dǎo)噴霧處理后提高水稻抗性免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平，激活水稻抗性響應(yīng)蛋白，表明貝萊斯芽孢桿菌tcs001，和/或貝萊斯芽孢桿菌tcs001脂肽類粗提物激活水稻對(duì)稻瘟病菌的抗性反應(yīng)，激活水稻活性氧積累。