本發(fā)明涉及可用于哺乳動(dòng)物的治療和/或預(yù)防的有機(jī)化合物，并且特別地涉及調(diào)節(jié)nlrp3抑制的化合物。本發(fā)明提供式i的新穎化合物，其中，r1為h或烷基；r2選自：i.包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)選自烷基、oh、鹵代、鹵代烷基、羥基烷基或氧代的1至2個(gè)取代基取代；ii.-ch2-雜環(huán)，其中該雜環(huán)為包含單個(gè)o雜原子的5元至6元雜環(huán)；iii.任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和oh的1至2個(gè)取代基取代的4元至6元環(huán)烷基；和iv.任選地經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的9元雙環(huán)雜環(huán)；x為–o-、–ch2-、-nh-或–n(ch3)-；w選自環(huán)系統(tǒng)a和br3為h、鹵代、烷基、烷氧基或烷氧基烷基，其中r1和r3中的一者為h并且另一者不為h；r4為鹵代、烷基、烷氧基、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基；r5為h；或者r4和r5以及與它們所連接的原子形成i)任選地經(jīng)氧代取代的4元至5元環(huán)烷基環(huán)，或ii)任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和鹵代的1至2個(gè)取代基取代的包含單個(gè)o雜原子的5元雜環(huán)；r6為鹵代、鹵代烷基或oh；r7為h或f；及其藥用鹽。此外，本發(fā)明包括所有外消旋混合物、它們的全部相應(yīng)對(duì)映體和/或光學(xué)異構(gòu)體。
背景技術(shù)：
1、nod樣受體(nlr)家族(含pyrin結(jié)構(gòu)域的蛋白3(nlrp3)炎性體)為炎癥過(guò)程的組分，并且其異?；钚栽谶z傳性疾患諸如cryopyrin相關(guān)的周期性綜合征(caps)和復(fù)雜疾病諸如多發(fā)性硬化癥、2型糖尿病、阿爾茨海默病和動(dòng)脈粥樣硬化中具有致病性。
2、nlrp3是一種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子，可感知許多病原體來(lái)源、環(huán)境和宿主來(lái)源的因素?；罨?，nlrp3與凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白結(jié)合，該蛋白含有胱天蛋白酶活化和募集結(jié)構(gòu)域(asc)。然后，asc聚合形成大的聚集體，稱(chēng)為asc斑點(diǎn)。聚合asc繼而與半胱氨酸蛋白酶胱天蛋白酶-1相互作用，以形成稱(chēng)為炎性體的絡(luò)合物。這導(dǎo)致胱天蛋白酶-1的活化，其裂解促炎癥性細(xì)胞因子il-1β和il-18的前體形式(分別稱(chēng)為pro-il-1β和pro-il-18)，從而活化這些細(xì)胞因子。胱天蛋白酶-1還介導(dǎo)一種類(lèi)型的稱(chēng)為細(xì)胞焦亡的炎癥細(xì)胞死亡。asc斑點(diǎn)也可募集并且活化胱天蛋白酶-8，后者可處理pro-il-1β和pro-il-18并且觸發(fā)凋亡細(xì)胞死亡。
3、胱天蛋白酶-1將pro-il-1β和pro-il-18裂解為其活性形式，這些活性形式由細(xì)胞分泌。活性胱天蛋白酶-1還裂解gasdermin-d以觸發(fā)細(xì)胞焦亡。胱天蛋白酶-1也可通過(guò)控制焦亡細(xì)胞死亡通路來(lái)介導(dǎo)警報(bào)蛋白分子諸如il-33和高遷移率族蛋白1(hmgb1)的釋放。胱天蛋白酶-1還裂解細(xì)胞內(nèi)il-1r2，導(dǎo)致其降解并且使il-1α釋放。在人體細(xì)胞中，胱天蛋白酶-1還可控制il-37的加工和分泌。胱天蛋白酶-1的許多其他底物諸如細(xì)胞骨架和糖酵解通路的組分可能導(dǎo)致胱天蛋白酶-1依賴(lài)性炎癥。
4、nlrp3依賴(lài)性asc斑點(diǎn)釋放到細(xì)胞外環(huán)境中，在那里該斑點(diǎn)可活化胱天蛋白酶-1、誘導(dǎo)胱天蛋白酶-1底物的加工并且傳播炎癥。
5、來(lái)源于nlrp3炎性體活化的活性細(xì)胞因子是炎癥的重要驅(qū)動(dòng)因素，并且與其他細(xì)胞因子通路相互作用以形成對(duì)感染和損傷的免疫應(yīng)答。例如，il-1β信號(hào)傳導(dǎo)誘導(dǎo)促炎癥性細(xì)胞因子il-6和tnf的分泌。il-1β和il-18與il-23協(xié)同作用以誘導(dǎo)記憶性cd4?th17細(xì)胞和γδt細(xì)胞在缺乏t細(xì)胞受體參與的情況下產(chǎn)生il-17。il-18和il-12也協(xié)同以誘導(dǎo)來(lái)自記憶性t細(xì)胞和nk細(xì)胞產(chǎn)生ifn-γ，驅(qū)動(dòng)th1應(yīng)答。
6、遺傳性caps疾病muckle-wells綜合征(mws)、家族性寒冷型自身炎癥綜合征(fcas)和新生兒發(fā)作的多系統(tǒng)炎癥性疾病(nomid)由nlrp3的功能獲得型突變引起，因此將nlrp3定義為炎癥過(guò)程的關(guān)鍵組分。nlrp3也與許多復(fù)雜疾病的發(fā)病機(jī)理有關(guān)，這些疾病特別地包括代謝疾患諸如2型糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖癥和痛風(fēng)。
7、nlrp3在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用正在顯現(xiàn)，并且肺部疾病也被證明受到nlrp3的影響。nlrp3也已被認(rèn)為在許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥中起作用，所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥包括帕金森病(pd)、阿爾茨海默病(ad)、癡呆、亨汀頓病、腦性瘧疾、肺炎球菌性腦膜炎引起的腦損傷(walsh等人,nature?reviews,15:84-97,2014，和dempsey等人brain.behav.immun.201761:306-316)。nlrp3也被證明在許多肺部疾病中起作用，所述肺部疾病包括慢性阻塞性肺疾患(copd)、哮喘(包括類(lèi)固醇抵抗性哮喘)、石棉肺和硅肺(denardo等人,am.j.pathol.,184:42-54,2014以及kim等人am?j?respir?crit?caremed.2017?196(3):283-97)。此外，nlrp3在肝病、腎病和衰老的發(fā)展中具有作用。這些關(guān)聯(lián)中的許多是使用nlrp3-/-小鼠來(lái)定義的，但是也有關(guān)于這些疾病中nlrp3特異性活化的見(jiàn)解。在2型糖尿病(t2d)中，胰島淀粉樣蛋白多肽在胰腺中的沉積活化nlrp3和il-1β信號(hào)傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡和炎癥。
8、數(shù)種小分子已證明用于抑制nlrp3炎性小體。格列本脲響應(yīng)于nlrp3而不是nlrc4或nlrp1的活化，在微摩爾濃度下抑制il-1β產(chǎn)生。其他先前表征的弱nlrp3抑制劑包括小白菊內(nèi)酯、3,4-亞甲二氧基-β-硝基苯乙烯和二甲基亞砜(dmso)，盡管這些藥劑具有有限的效力并且是非特異性的。
9、目前針對(duì)nlrp3相關(guān)疾病的治療包括靶向il-1的生物藥劑。這些是重組il-1受體拮抗劑阿那白滯素、中和il-1β抗體卡那單抗(canakinumab)和可溶性誘餌il-1受體利納西普(rilonacept)。這些方法已被證明可以成功治療caps，并且這些生物藥劑已用于針對(duì)其他il-1β相關(guān)疾病的臨床試驗(yàn)。
10、需要提供具有改善的藥理和/或生理和/或理化特性的化合物，和/或?yàn)橐阎衔锾峁┯杏玫奶娲返幕衔铩?/p>
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明提供式i的新穎化合物，
2、
3、其中，
4、r1為h或烷基；
5、r2選自：
6、i.包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)選自烷基、oh、鹵代、鹵代烷基、羥基烷基或氧代的1至2個(gè)取代基取代；
7、ii.-ch2-雜環(huán)，其中該雜環(huán)為包含單個(gè)o雜原子的5元至6元雜環(huán)；
8、iii.任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和oh的1至2個(gè)取代基取代的4元至6元環(huán)烷基；和
9、iv.任選地經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的9元雙環(huán)雜環(huán)；
10、x為–o-、–ch2-、-nh-或–n(ch3)-；
11、w選自環(huán)系統(tǒng)a和b
12、
13、r3為h、鹵代、烷基、烷氧基或烷氧基烷基，其中r1和r3中的一者為h并且另一者不為h；
14、r4為鹵代、烷基、烷氧基、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基；
15、r5為h；
16、或者r4和r5以及與它們所連接的原子形成
17、i)任選地經(jīng)氧代取代的4元至5元環(huán)烷基環(huán)，或
18、ii)任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和鹵代的1至2個(gè)取代基取代的包含單個(gè)o雜原子的5元雜環(huán)；
19、r6為鹵代、鹵代烷基或oh；
20、r7為h或f；
21、及其藥用鹽。
22、術(shù)語(yǔ)“烷基”表示具有1至6個(gè)碳原子的單價(jià)直鏈或支鏈飽和烴基。在一些實(shí)施例中，如果沒(méi)有另行說(shuō)明，則烷基包含1個(gè)至6個(gè)碳原子(c1-6-烷基)或1個(gè)至4個(gè)碳原子(c1-4-烷基)。c1-6-烷基的實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基和戊基。特別的烷基包括甲基和乙基。
23、術(shù)語(yǔ)“烷氧基”表示式-o-r'的基團(tuán)，其中r'為c1-6-烷基基團(tuán)。c1-6-烷氧基基團(tuán)的實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基和叔丁氧基。
24、術(shù)語(yǔ)“烷氧基烷基”表示一種烷基基團(tuán)，其中該烷基基團(tuán)的氫原子中的一個(gè)已經(jīng)被烷氧基基團(tuán)替代。烷氧基烷基的實(shí)例為甲氧基甲基和甲氧基乙基。
25、術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”表示單環(huán)或多環(huán)飽和或部分不飽和的非芳族烴。在一些實(shí)施例中，除非另外描述，否則環(huán)烷基包含3個(gè)至8個(gè)碳原子、3個(gè)至6個(gè)碳原子或3個(gè)至5個(gè)碳原子。在一些實(shí)施例中，環(huán)烷基為飽和單環(huán)或多環(huán)烴。環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基等。特定實(shí)例為環(huán)丁基。
26、術(shù)語(yǔ)“鹵素”、“鹵化物”和“鹵代”在本文中可互換使用并且表示氟、氯、溴或碘。
27、術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”表示其中c1-6-烷基基團(tuán)的至少一個(gè)氫原子已被相同或不同的鹵素原子替換的c1-6-烷基基團(tuán)。鹵代烷基的實(shí)例包括氟甲基、二氟甲基和三氟甲基。
28、術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基”表示其中c1-6-烷氧基基團(tuán)的至少一個(gè)氫原子已被相同或不同的鹵素原子替換的c1-6-烷氧基基團(tuán)。鹵代烷氧基的實(shí)例為二氟甲氧基、三氟甲氧基、二氟乙氧基和三氟乙氧基。
29、術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”表示4至9個(gè)環(huán)原子的單價(jià)飽和或部分不飽和的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，其包含選自n、o和s的1、2或3個(gè)環(huán)雜原子，其余環(huán)原子為碳。單環(huán)飽和雜環(huán)的實(shí)例為氮雜環(huán)丁基、二氮雜環(huán)庚基、吡咯烷基、四氫呋喃基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、異噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氫吡喃基、四氫硫代吡喃基、嗎啉基和哌嗪基。多環(huán)飽和雜環(huán)的實(shí)例為氮雜螺庚基、二氮雜螺庚基、氮雜螺辛基、二偶氮基螺辛基、二氮雜螺壬基、氧雜氮雜螺辛基和氧雜二氮雜螺壬基。雜環(huán)的特定實(shí)例為哌啶基。
30、術(shù)語(yǔ)“羥基”表示-oh基團(tuán)。
31、術(shù)語(yǔ)“羥基烷基”表示其中烷基基團(tuán)的至少一個(gè)氫原子已被羥基基團(tuán)代替的烷基基團(tuán)。羥基烷基的實(shí)例包括羥基甲基、羥基乙基、羥基丙基、羥基甲基乙基、羥基甲基丙基和二羥基丙基。術(shù)語(yǔ)“氰基”表示–c≡n基團(tuán)。
32、術(shù)語(yǔ)“氧代”表示二價(jià)氧原子＝o。
33、術(shù)語(yǔ)“藥用鹽”是指保留游離堿或游離酸的生物效果和性質(zhì)的那些鹽，這些鹽在生物學(xué)或其他方面不是不合需要的。這些鹽用無(wú)機(jī)酸諸如三氟乙酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸(特別是鹽酸)和有機(jī)酸諸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、n-乙?；腚装彼嵝纬?。另外，這些鹽可通過(guò)將無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿加入游離酸中來(lái)制備。衍生自無(wú)機(jī)堿的鹽包括但不限于鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂鹽。衍生自有機(jī)堿的鹽包括但不限于以下物質(zhì)的鹽：伯胺、仲胺和叔胺，包括天然存在的取代胺的取代胺，環(huán)胺和堿性離子交換樹(shù)脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、賴(lài)氨酸、精氨酸、n-乙基哌啶、哌啶、多胺樹(shù)脂。式i化合物也可以?xún)尚噪x子的形式存在。特別優(yōu)選的式i化合物的藥用鹽是與甲酸形成的鹽和與鹽酸形成的鹽，產(chǎn)生鹽酸鹽、二鹽酸鹽或三鹽酸鹽。
34、縮寫(xiě)um意指微摩爾，并且與符號(hào)μm等同。
35、縮寫(xiě)ul意指微升，并且與符號(hào)μl等同。
36、縮寫(xiě)ug意指微克，并且與符號(hào)μg等同。
37、式i化合物可以含有若干不對(duì)稱(chēng)中心，并且可以以光學(xué)純對(duì)映體、對(duì)映體的混合物(例如外消旋體)、光學(xué)純非對(duì)映體、非對(duì)映體的混合物、非對(duì)映外消旋體或非對(duì)映外消旋體的混合物存在。
38、根據(jù)cahn-ingold-prelog規(guī)范，不對(duì)稱(chēng)碳原子可以是"r"或"s"構(gòu)型。
39、本發(fā)明的另一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物及其藥用鹽或酯，特別是如本文所述的根據(jù)式i的化合物及其藥用鹽，更特別地是如本文所述的根據(jù)式i的化合物。
40、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r1為h或烷基并且r3為h、烷基或烷氧基烷基，其中r1或r3中的一者為h并且另一者不為h。
41、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r1為h或烷基并且r3為h或烷基，其中r1或r3中的一者為h并且另一者為烷基。
42、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r1為h并且r3為烷基。
43、本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式(i)的化合物，其中r2選自
44、i.包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)烷基、鹵代、鹵代烷基、羥基烷基或氧代取代；
45、ii.-ch2-雜環(huán)，其中該雜環(huán)為包含單個(gè)o雜原子的5元至6元雜環(huán)；
46、iii.任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和oh的1至2個(gè)取代基取代的4元至6元環(huán)烷基；和
47、iv.任選地經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的9元雙環(huán)雜環(huán)。
48、本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式(i)的化合物，其中r2選自
49、i.包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)烷基或經(jīng)烷基和oh兩者取代；和
50、ii.任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和oh的1至2個(gè)取代基取代的4元至6元環(huán)烷基。
51、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r2為包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)烷基或經(jīng)烷基和oh兩者取代。
52、本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式(i)的化合物，其中r2選自
53、i.經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的6元雜環(huán)；
54、ii.-ch2-雜環(huán)，其中該雜環(huán)為包含單個(gè)o雜原子的5元至6元雜環(huán)；
55、iii.經(jīng)烷基和oh取代的4元環(huán)烷基；和
56、iv.任選地經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的9元雙環(huán)雜環(huán)。
57、本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式(i)的化合物，其中r2選自
58、i.經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的6元雜環(huán)，和
59、ii.經(jīng)烷基和oh取代的4元環(huán)烷基。
60、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中x為o或–ch2-。
61、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r7為h。
62、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中w為環(huán)系統(tǒng)a
63、
64、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r5為h，或者r4和r5以及與它們所連接的原子形成
65、i.5元環(huán)烷基環(huán)，或
66、ii.包含單個(gè)o雜原子的5元雜環(huán)。
67、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r5為h，或者r4和r5以及與它們所連接的原子形成
68、i.任選地經(jīng)氧代取代的4元至5元環(huán)烷基環(huán)，或
69、ii.包含單個(gè)o雜原子的5元雜環(huán)。
70、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r5為h。
71、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中w選自環(huán)系統(tǒng)a、c和d
72、其中
73、r3為h或烷基，其中r1和r3中的一者為h并且另一者不為h；
74、r4為烷基、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基；
75、r5為h；
76、r6為oh；并且
77、y為ch2或o。
78、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r4為鹵代、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基。
79、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r4為烷基、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基。
80、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r4為氰基。
81、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中r6為oh。
82、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中，
83、r1為h或烷基；
84、r2選自：
85、i.包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)烷基或經(jīng)烷基和oh兩者取代；和
86、ii.任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和oh的1至2個(gè)取代基取代的4元至6元環(huán)烷基；
87、x為–o-或–ch2-；
88、w選自環(huán)系統(tǒng)a、c和d
89、其中
90、r3為h或烷基，其中r1和r3中的一者為h并且另一者不為h；
91、r4為烷基、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基；
92、r5為h；
93、r6為oh；
94、y為ch2或o；
95、及其藥用鹽。
96、本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中
97、r1為h或烷基；
98、r2為包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)烷基或經(jīng)烷基和oh兩者取代，并且
99、x為–o-或–ch2-；
100、w選自環(huán)系統(tǒng)c和d
101、其中
102、r3為h或烷基，其中r1和r3中的一者為h并且另一者不為h；
103、r4為烷基、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基；
104、r5為h；
105、r6為oh；
106、y為ch2或o；
107、及其藥用鹽。
108、本發(fā)明的一實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中，
109、r1為h或烷基；
110、r2選自：
111、i.包含單個(gè)o或單個(gè)n雜原子的5元至6元雜環(huán)，其中該雜環(huán)任選地經(jīng)烷基、鹵代、鹵代烷基、羥基烷基或氧代取代；
112、ii.-ch2-雜環(huán)，其中該雜環(huán)為包含單個(gè)o雜原子的5元至6元雜環(huán)；
113、iii.任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和oh的1至2個(gè)取代基取代的4元至6元環(huán)烷基；和
114、iv.任選地經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的9元雙環(huán)雜環(huán)；
115、x為–o-、–ch2-、-nh-或–n(ch3)-；
116、w選自環(huán)系統(tǒng)a和b
117、
118、r3為h、鹵代、烷基、烷氧基或烷氧基烷基，其中r1和r3中的一者為h并且另一者不為h；
119、r4為鹵代、烷基、烷氧基、氰基、鹵代烷基或鹵代烷氧基；
120、r5為h；
121、或者r4和r5以及與它們所連接的原子形成
122、i.任選地經(jīng)氧代取代的4元至5元環(huán)烷基環(huán)，或
123、ii.任選地經(jīng)獨(dú)立地選自烷基和鹵代的1至2個(gè)取代基取代的包含單個(gè)o雜原子的5元雜環(huán)；
124、r6為鹵代、鹵代烷基或oh；
125、r7為h或f；
126、及其藥用鹽。
127、本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中
128、r1為h或烷基并且r3為h或烷基，其中r1或r3中的一者為h并且另一者為烷基；
129、r2選自：
130、i.經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的6元雜環(huán)，和
131、ii.經(jīng)烷基和oh取代的4元環(huán)烷基；
132、x為o或–ch2-；
133、w為環(huán)系統(tǒng)a：
134、
135、r4為氰基；
136、r5為h；
137、r6為oh；
138、及其藥用鹽。
139、本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其中
140、r1為h并且r3為烷基；
141、r2選自：
142、i.經(jīng)烷基取代的包含單個(gè)n雜原子的6元雜環(huán)，和
143、ii.經(jīng)烷基和oh取代的4元環(huán)烷基；
144、x為o或–ch2-；
145、w為環(huán)系統(tǒng)a：
146、
147、r4為氰基；
148、r5為h；
149、r6為oh；
150、及其藥用鹽。
151、如本文所述的式i化合物的特別的實(shí)例選自
152、4-[8-[(3r)-1-乙基-3-哌啶基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-羥基-5-甲基-苯甲腈；甲酸；
153、4-[8-[(3r)-1-乙基-3-哌啶基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-羥基-5-甲基-苯甲腈；
154、4-[8-[(3r)-1-乙基-3-哌啶基]-6,7-二氫-5h-吡啶并[2,3-c]噠嗪-3-基]-3-羥基-5-甲基-苯甲腈；
155、3-羥基-4-[8-(3-羥基-3-甲基-環(huán)丁基)-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-5-甲基-苯甲腈；
156、及其藥用鹽。
157、如本文所述的式i化合物的其他特定實(shí)例選自
158、3-羥基-4-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-5-甲基-苯甲腈；2,2,2-三氟乙酸；
159、3-羥基-4-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-5-甲基-苯甲腈；
160、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-茚滿(mǎn)-4-醇；2,2,2-三氟乙酸；
161、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-茚滿(mǎn)-4-醇；
162、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-2,3-二氫苯并呋喃-4-醇；2,2,2-三氟乙酸；
163、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-2,3-二氫苯并呋喃-4-醇；
164、4-[8-[(3r,5s)-1-乙基-5-羥基-3-哌啶基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-羥基-5-甲基-苯甲腈；
165、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-2,3-二氫苯并呋喃-4-醇；
166、2-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-甲基-5-(三氟甲基)苯酚；
167、4-[8-[(3r)-1-乙基吡咯烷-3-基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-羥基-5-甲基-苯甲腈；2,2,2-三氟乙酸；
168、4-[8-[(3r)-1-乙基吡咯烷-3-基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-羥基-5-甲基-苯甲腈；
169、2-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3,5-二甲基-苯酚；2,2,2-三氟乙酸
170、2-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3,5-二甲基-苯酚；
171、2-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-甲基-5-(三氟甲氧基)苯酚；2,2,2-三氟乙酸；
172、2-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-甲基-5-(三氟甲氧基)苯酚；
173、4-[8-[(3r)-1-乙基-3-哌啶基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-羥基-苯甲腈；2,2,2-三氟乙酸；
174、4-[8-[(3r)-1-乙基-3-哌啶基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-3-羥基-苯甲腈；
175、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]茚滿(mǎn)-4-醇；2,2,2-三氟乙酸；
176、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]茚滿(mǎn)-4-醇；
177、3-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]雙環(huán)[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-2-醇；2,2,2-三氟乙酸；
178、3-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-4-甲基-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]雙環(huán)[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-2-醇；
179、5-[8-[(1r,3s)-3-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-2,3-二氫苯并呋喃-4-醇；
180、5-[8-[(3s,4r)-3-羥基四氫吡喃-4-基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-2,3-二氫苯并呋喃-4-醇；
181、及其藥用鹽。
182、如本文所述的式i化合物的其他特定實(shí)例選自
183、5-[8-(4-羥基環(huán)己基)-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-2,3-二氫苯并呋喃-4-醇；
184、及其藥用鹽。
185、如本文所述的式i化合物的優(yōu)選的實(shí)例選自
186、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-2,3-二氫苯并呋喃-4-醇；
187、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-茚滿(mǎn)-4-醇；2,2,2-三氟乙酸；
188、5-[8-[(1r,2r)-2-羥基環(huán)己基]-6,7-二氫噠嗪并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-基]-6-甲基-茚滿(mǎn)-4-醇；
189、及其藥用鹽。
190、本發(fā)明的另一實(shí)施例提供一種含有本發(fā)明化合物和治療惰性載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物或藥物，以及使用本發(fā)明化合物來(lái)制備此類(lèi)組合物和藥物的方法。在一個(gè)實(shí)例中，式i化合物可通過(guò)在環(huán)境溫度在適當(dāng)?shù)膒h和期望的純度下與生理學(xué)上可接受的載體(即在所用劑量和濃度下對(duì)接受者無(wú)毒的載體)混合而配制為蓋倫(galenical)施用形式。配制物的ph主要取決于化合物的具體用途和濃度，但優(yōu)選地在約3至約8的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)例中，將式i化合物在ph?5的乙酸鹽緩沖液中配制。在另一實(shí)施例中，式i化合物為無(wú)菌的?；衔锟梢岳缱鳛楣腆w或無(wú)定形組合物、作為凍干配制物或作為水溶液儲(chǔ)存。
191、以與良好醫(yī)學(xué)實(shí)踐一致的方式配制、計(jì)量和施用組合物。在這種情況下需要考慮的因素包括所治療的特定疾患、所治療的特定哺乳動(dòng)物、個(gè)體患者的臨床病癥、疾患的原因、藥劑的遞送部位、施用方法、施用的時(shí)間安排，以及執(zhí)業(yè)醫(yī)師已知的其他因素。
192、本發(fā)明的化合物可通過(guò)任何適合的方式施用，包括口服、局部(包括頰和舌下)、直腸、陰道、經(jīng)皮、腸胃外、皮下、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)、皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外和鼻內(nèi)，以及(如果需要用于局部治療)病灶內(nèi)施用。腸胃外輸注包括肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下施用。本發(fā)明化合物可以任何方便的施用形式施用，例如，片劑、粉劑、膠囊劑、溶液劑、分散劑、混懸劑、糖漿劑、噴霧劑、栓劑、凝膠劑、乳劑、貼劑等。此類(lèi)組合物可以包含藥物制劑中常規(guī)的組分，例如，稀釋劑、載體、ph調(diào)節(jié)劑、甜味劑、填充劑和其他活性劑。
193、通過(guò)混合本發(fā)明的化合物和載體或賦形劑來(lái)制備通常的配制物。適合的載體和賦形劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且在例如ansel,howard?c.等人，ansel’spharmaceutical?dosage?forms?and?drug?delivery?systems.philadelphia:lippincott,williams和wilkins,2004；gennaro,alfonso?r.等人remington:the?scienceand?practice?of?pharmacy.philadelphia:lippincott,williams和wilkins,2000；以及rowe,raymond?c.handbookof?pharmaceutical?excipients.chicago,pharmaceuticalpress,2005中有詳細(xì)描述。配制物還可以包含一種或多種緩沖劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、潤(rùn)濕劑、潤(rùn)滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、不透明劑、助流劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、加香劑、調(diào)味劑、稀釋劑和其他已知的添加劑，以提供美觀(guān)的藥物(例如，本發(fā)明的化合物或其藥物組合物)展示或有助于藥物產(chǎn)品(例如，藥物)的制備。
194、式i化合物及其藥用鹽可與藥學(xué)上惰性的無(wú)機(jī)或有機(jī)助劑一起加工，以用于生產(chǎn)片劑、包衣片劑、糖衣丸、硬明膠膠囊、注射液或局部制劑。例如，可使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其鹽等作為片劑、糖衣丸和硬明膠膠囊的此類(lèi)助劑。
195、用于軟明膠膠囊的合適的助劑為例如植物油、蠟、脂肪、半固體物質(zhì)和液體多元醇等。
196、用于制備溶液和糖漿的合適的助劑為例如水、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖等。
197、用于注射液的合適的助劑為例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。
198、用于栓劑的合適的助劑為例如天然或硬化油、蠟、脂肪、半固體或液體多元醇等。
199、用于局部眼用制劑的合適的助劑為例如環(huán)糊精、甘露醇或本領(lǐng)域已知的許多其他載體和賦形劑。
200、此外，藥物制劑可以含有防腐劑、增溶劑、增粘物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、香料、用于改變滲透壓的鹽、緩沖劑掩模劑或抗氧化劑。它們還可以含有其他有治療價(jià)值的物質(zhì)。
201、劑量可以在寬范圍內(nèi)變化，當(dāng)然將適合每種特定情況下的各種要求。一般而言，在口服施用的情況下，每kg體重約0.1mg至20mg、優(yōu)選地每kg體重約0.5mg至4mg(例如每人約300mg)的日劑量應(yīng)當(dāng)是合適的，其優(yōu)選地分為1至3個(gè)單獨(dú)的劑量(可由例如相同的量組成)。在局部施用的情況下，配制物可包含按重量計(jì)0.001％至15％的藥物，并且所需劑量可以為0.1mg至25mg，每天或每周單次施用、或每天多次施用(2至4次)，或每周多次施用。但是，顯而易見(jiàn)的是，當(dāng)顯示為適用時(shí)，可超過(guò)本文中給出的上限或下限。
202、本發(fā)明的一實(shí)施例是如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其用作治療活性物質(zhì)。
203、本發(fā)明的一實(shí)施例是如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其用于治療或預(yù)防疾病、疾患或病癥，其中該疾病、疾患或病癥對(duì)nlrp3抑制有應(yīng)答。
204、本發(fā)明的一實(shí)施例是如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其用于治療或預(yù)防疾病、疾患或病癥，其中該疾患或病癥對(duì)nlrp3抑制有應(yīng)答。
205、如本文所用，術(shù)語(yǔ)“nlrp3抑制”是指nlrp3活性水平的完全或部分降低，并且包括例如抑制活性nlrp3和/或抑制nlrp3的活化。
206、有證據(jù)表明nlrp3誘導(dǎo)的il-1和il-18在與多種不同疾患相關(guān)或由多種不同疾患引起的炎癥應(yīng)答中發(fā)揮作用(menu等人,clinical?and?experimental?immunology,166:1-15,2011；strowig等人,nature,481:278-286,2012)。
207、在一個(gè)實(shí)施例中，疾病、疾患或病癥選自：
208、(i)炎癥；
209、(ii)自身免疫性疾??；
210、(iii)癌癥；
211、(iv)感染；
212、(v)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾??；
213、(vi)代謝疾??；
214、(vii)心血管疾??；
215、(viii)呼吸道疾??；
216、(ix)肝臟疾?。?/p>
217、(x)腎臟疾?。?/p>
218、(xi)眼部疾病；
219、(xii)皮膚疾病；
220、(xiii)淋巴病癥；
221、(xiv)心理紊亂；
222、(xv)移植物抗宿主??；
223、(xvi)異常性疼痛；
224、(xvii)與糖尿病相關(guān)的病癥；以及
225、(xviii)已確定個(gè)體攜帶nlrp3中種系或體細(xì)胞非沉默突變的任何疾病
226、在另一個(gè)實(shí)施例中，疾病、疾患或病癥選自：
227、(i)癌癥；
228、(ii)感染；
229、(iii)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾??；
230、(iv)心血管疾??；
231、(v)肝臟疾??；
232、(vi)眼部疾?。缓?/p>
233、(vii)皮膚疾病。
234、在本發(fā)明的再一個(gè)典型實(shí)施例中，疾病、疾患或病癥是炎癥。可以治療或預(yù)防的炎癥的實(shí)例包括與以下疾病相關(guān)或由以下疾病引起的炎癥應(yīng)答：
235、(i)皮膚病，諸如接觸性超敏反應(yīng)、大皰性類(lèi)天皰瘡、曬傷、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、過(guò)敏性接觸性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔蘚、硬皮病、天皰瘡、大皰性表皮松解癥、蕁麻疹、紅斑或脫發(fā)；
236、(ii)關(guān)節(jié)病，諸如骨關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、成人發(fā)作的斯蒂爾病、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年慢性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)或血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病(例如強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎或賴(lài)特爾病)；
237、(iii)肌肉疾病，諸如多發(fā)性肌炎或重癥肌無(wú)力；
238、(iv)胃腸道疾病，諸如炎癥性腸病(包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎)、結(jié)腸炎、胃潰瘍、乳糜瀉、直腸炎、胰腺炎、嗜酸性胃腸炎、肥大細(xì)胞增多癥、抗磷脂綜合征，或可能對(duì)腸道以外產(chǎn)生影響的食物相關(guān)過(guò)敏(例如偏頭痛、鼻炎或濕疹)；
239、(v)呼吸系統(tǒng)疾病，諸如慢性阻塞性肺病(copd)、哮喘(包括嗜酸粒細(xì)胞性哮喘、支氣管哮喘、過(guò)敏性哮喘、內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘或粉塵性哮喘，且特別是慢性或頑固性哮喘，諸如晚期哮喘和氣道高反應(yīng)性)、支氣管炎、鼻炎(包括急性鼻炎、過(guò)敏性鼻炎、萎縮性鼻炎、慢性鼻炎、干酪性鼻炎、肥厚性鼻炎、膿皰性鼻炎、干燥性鼻炎、藥物性鼻炎、膜性鼻炎、季節(jié)性鼻炎例如花粉熱和血管舒縮性鼻炎)、鼻竇炎、特發(fā)性肺纖維化(ipf)、結(jié)節(jié)病、農(nóng)民肺、矽肺、石棉肺、火山灰引起的炎癥、成人呼吸窘迫綜合征、過(guò)敏性肺炎或特發(fā)性間質(zhì)性肺炎；
240、(vi)血管疾病，諸如動(dòng)脈粥樣硬化、白塞氏病、血管炎或韋格氏肉芽腫??；
241、(vii)自身免疫性疾病，諸如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、系統(tǒng)性硬化癥、橋本甲狀腺炎、i型糖尿病、特發(fā)性血小板減少性紫癜或格雷夫斯病；
242、(viii)眼部疾病，諸如葡萄膜炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎或春季結(jié)膜炎；
243、(ix)神經(jīng)疾病，諸如多發(fā)性硬化癥或腦脊髓炎；
244、(x)感染或感染相關(guān)疾病，諸如獲得性免疫缺陷綜合征(aids)、急性或慢性細(xì)菌感染、急性或慢性寄生蟲(chóng)感染、急性或慢性病毒感染、急性或慢性真菌感染、腦膜炎、肝炎(甲型、乙型或丙型或其他病毒性肝炎)、腹膜炎、肺炎、會(huì)厭炎、瘧疾、登革出血熱、利什曼病、鏈球菌性肌炎、結(jié)核分枝桿菌(包括結(jié)核分枝桿菌和hiv合并感染)、胞內(nèi)鳥(niǎo)分枝桿菌、卡氏肺囊蟲(chóng)肺炎、睪丸炎/附睪炎、軍團(tuán)菌、萊姆病、甲型流感、eb病毒感染、病毒性腦炎/無(wú)菌性腦膜炎或盆腔炎性疾病；
245、(xi)腎臟疾病，諸如系膜增生性腎小球腎炎、腎病綜合征、腎炎、腎小球腎炎、肥胖相關(guān)性腎小球病、急性腎衰竭、急性腎損傷、尿毒癥、腎病綜合征、腎纖維化(包括慢性晶體腎病)或腎性高血壓；
246、(xii)淋巴疾病，諸如castleman?。?/p>
247、(xiii)免疫系統(tǒng)的疾病或涉及免疫系統(tǒng)的疾病，諸如高ige綜合征、麻風(fēng)病、家族性噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多癥或移植物抗宿主?。?/p>
248、(xiv)肝臟疾病，諸如慢性活動(dòng)性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、酒精性脂肪性肝病(afld)、酒精性脂肪性肝炎(ash)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、暴發(fā)性肝炎、肝纖維化或肝功能衰竭；
249、(xv)癌癥，包括上面列出的那些癌癥；
250、(xvi)燒傷、創(chuàng)傷、外傷、出血或中風(fēng)；
251、(xvii)輻射暴露；
252、(xviii)代謝性疾病，諸如2型糖尿病(t2d)、動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖、痛風(fēng)或假性痛風(fēng)；和/或
253、(xix)疼痛，諸如炎癥性痛覺(jué)過(guò)敏、盆腔疼痛、異常性疼痛、神經(jīng)性疼痛或癌癥引起的骨痛。
254、本發(fā)明的一實(shí)施例是如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其用于治療或預(yù)防選自以下的疾病、疾患或病癥：
255、炎癥；
256、自身免疫性疾?。?/p>
257、癌癥；
258、感染；
259、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾??；
260、代謝疾?。?/p>
261、心血管疾?。?/p>
262、呼吸道疾??；
263、肝臟疾??；
264、腎臟疾病；
265、眼部疾??；
266、皮膚疾?。?/p>
267、淋巴病癥；
268、心理紊亂；
269、移植物抗宿主?。?/p>
270、異常性疼痛；
271、與糖尿病相關(guān)的病癥；以及
272、已確定個(gè)體攜帶nlrp3中種系或體細(xì)胞非沉默突變的任何疾病。
273、本發(fā)明的一實(shí)施例為如本文所述的根據(jù)式i的化合物在治療或預(yù)防疾病、疾患或病癥中的用途，其中該疾病、疾患或病癥對(duì)nlrp3抑制有反應(yīng)。
274、本發(fā)明的一實(shí)施例是如本文所述的根據(jù)式i的化合物在治療或預(yù)防選自阿爾茨海默病和帕金森病的疾病、疾患或病癥中的用途。
275、本發(fā)明的一實(shí)施例為如本文所述的根據(jù)式i的化合物用于治療或預(yù)防選自哮喘和copd的疾病、疾患或病癥中的用途。
276、本發(fā)明的一實(shí)施例是如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其用于治療或預(yù)防選自阿爾茨海默病和帕金森病的疾病、疾患或病癥。
277、本發(fā)明的一實(shí)施例為如本文所述的根據(jù)式i的化合物，其用于治療或預(yù)防選自哮喘和copd的疾病、疾患或病癥。
278、本發(fā)明的一實(shí)施例是如本文所述的根據(jù)式i的化合物用于制備藥物的用途，該藥物用于治療或預(yù)防選自阿爾茨海默病和帕金森病的疾病、疾患或病癥。
279、本發(fā)明的一實(shí)施例為如本文所述的根據(jù)式i的化合物用于制備藥物的用途，該藥物用于治療或預(yù)防選自哮喘和copd的疾病、疾患或病癥。
280、本發(fā)明的一實(shí)施例是一種治療或預(yù)防選自阿爾茨海默病和帕金森病的疾病、疾患或病癥的方法，該方法包括施用有效量的如本文所述的根據(jù)式i的化合物。
281、本發(fā)明的一實(shí)施例為一種治療或預(yù)防選自哮喘和copd的疾病、疾患或病癥的方法，該方法包括施用有效量的如本文所述的根據(jù)式i的化合物。
282、本發(fā)明的一實(shí)施例涉及一種抑制nlrp3的方法，該方法包括施用有效量的如本文所述的根據(jù)式i的化合物。
283、本發(fā)明的又一實(shí)施例是如本文所述的式i化合物，其根據(jù)所述方法中的任一者進(jìn)行制造。
284、本發(fā)明的一實(shí)施例是一種藥物組合物，其包含如本文所述的根據(jù)式i的化合物以及治療惰性載體。
285、測(cè)定程序
286、nlrp3和細(xì)胞焦亡
287、眾所周知，nlrp3的活化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞焦亡，并且這一特征在臨床疾病的表現(xiàn)中發(fā)揮著重要作用(yan-gang?liu等人,cell?death&disease,2017,8(2),e2579；alexander?wree等人,hepatology,2014,59(3),898-910；alex?baldwin等人,journal?of?medicinalchemistry,2016,59(5),1691-1710；ema?ozaki等人,journal?of?inflammationresearch,2015,8,15-27；zhen?xie和gang?zhao,neuroimmunology?neuroinflammation,2014,1(2),60-65；mattia?cocco等人,journal?of?medicinal?chemistry,2014,57(24),10366-10382；t.satoh等人,cell?death&disease,2013,4,e644)。因此，預(yù)計(jì)nlrp3的抑制劑將阻止細(xì)胞焦亡以及促炎癥性細(xì)胞因子(例如il-1β)從細(xì)胞的釋放。
288、thp-1細(xì)胞：培養(yǎng)和制備
289、將thp-1細(xì)胞(atcc#tib-202)在含有l(wèi)-谷氨酰胺(gibco#11835)并補(bǔ)充有1mm丙酮酸鈉(sigma#s8636)和青霉素(100單位/ml)/鏈霉素(0.1mg/ml)(sigma#p4333)在10％胎牛血清(fbs)(sigma#f0804)的rpmi中生長(zhǎng)。細(xì)胞按常規(guī)傳代并生長(zhǎng)至匯合(約106個(gè)細(xì)胞/ml)。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，收獲thp-1細(xì)胞并重懸于rpmi培養(yǎng)基(不含fbs)中。然后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)(sigma#t8154)檢查活力(>90％)。進(jìn)行適當(dāng)稀釋以得到625,000個(gè)細(xì)胞/ml的濃度。向該稀釋的細(xì)胞溶液中添加lps(sigma#l4524)以得到1μg/ml最終測(cè)定濃度(fac)。將40μl最終制劑等分到96孔板的每個(gè)孔中。由此制備的板用于化合物篩選。
290、thp-1細(xì)胞焦亡測(cè)定
291、按照以下方法分步測(cè)定進(jìn)行化合物篩選。
292、將含有1.0μg/ml?lps的thp-1細(xì)胞(25,000個(gè)細(xì)胞/孔)接種在40μlrpmi培養(yǎng)基(不含fbs)中，置于涂有聚d-賴(lài)氨酸(vwr#734-0317)的96孔、黑壁、透明底部細(xì)胞培養(yǎng)板中
293、將5μl化合物(8點(diǎn)半對(duì)數(shù)稀釋?zhuān)?0μm最高劑量)或媒介物(dmso?0.1％fac)添加到適當(dāng)?shù)目字?/p>
294、在37℃，5％co2孵育3小時(shí)
295、將5μl尼日利亞菌素(sigma#n7143)(fac?5μm)添加到所有孔中
296、在37℃，5％co2孵育1hr
297、孵育期結(jié)束時(shí)，以300xg旋轉(zhuǎn)板3分鐘并除去上清液
298、然后添加50μl刃天青(sigma#r7017)(fac?100μm刃天青，溶于不含fbs的rpmi培養(yǎng)基)，并在37℃和5％co2將板再孵育1-2小時(shí)在envision讀取器中以ex?560nm和em?590nm讀取板
299、ic50數(shù)據(jù)適合非線(xiàn)性回歸方程(對(duì)數(shù)抑制劑與響應(yīng)變量斜率4參數(shù))
300、細(xì)胞焦亡測(cè)定的結(jié)果總結(jié)于下表1中，為thp?ic50。
301、人全血il-1β釋放測(cè)定
302、對(duì)于全身遞送，當(dāng)化合物存在于血流中時(shí)抑制nlrp3的能力非常重要。由于這個(gè)原因，根據(jù)以下方案研究了人全血中多種化合物的nlrp3抑制活性。
303、鋰肝素管中的人全血取自來(lái)自志愿者供體小組的健康供體。
304、將80μl含有1μg/ml?lps的全血放入96孔透明底細(xì)胞培養(yǎng)板(corning#3585)中
305、將10μl化合物(8點(diǎn)半對(duì)數(shù)稀釋?zhuān)?0μm最高劑量)或媒介物(dmso?0.1％fac)添加到適當(dāng)?shù)目字?/p>
306、在37℃，5％co2孵育3小時(shí)
307、將10μl尼日利亞菌素(sigma#n7143)(10μm?fac)添加到所有孔中在37℃，5％co2孵育1hr
308、孵育期結(jié)束時(shí)，以300xg旋轉(zhuǎn)板5分鐘以沉淀細(xì)胞并除去20μl上清液，且添加到96孔v形底板中進(jìn)行il-1β分析(注意：含有上清液的這些板可以?xún)?chǔ)存在-80℃稍后進(jìn)行分析)
309、il-1β根據(jù)制造商方案(perkin?elmer-alphalisa?il-1kit?al220f-5000)進(jìn)行測(cè)量
310、ic50數(shù)據(jù)適合非線(xiàn)性回歸方程(對(duì)數(shù)抑制劑與響應(yīng)變量斜率4參數(shù))
311、人全血測(cè)定的結(jié)果總結(jié)于下表1中，為hwb?ic50。
312、herg篩選測(cè)定
313、在小分子藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中，導(dǎo)致藥物失敗的最常見(jiàn)不良副作用之一為心律失常。此類(lèi)失敗往往與藥物抑制人類(lèi)ether-à-go-go相關(guān)基因(herg)心臟鉀通道的能力有關(guān)。因此對(duì)herg心臟鉀通道沒(méi)有抑制或具有低抑制被視為有益的。
314、細(xì)胞
315、在羅氏產(chǎn)生并驗(yàn)證cho?crelox?herg細(xì)胞系(atcc參考編號(hào)pta-6812，雌性中國(guó)倉(cāng)鼠細(xì)胞)。即用型速凍cho-herg細(xì)胞在evotec(德國(guó))冷凍保存并直接用于實(shí)驗(yàn)。
316、實(shí)驗(yàn)溶液
317、細(xì)胞外溶液含有(以mm為單位)：nacl?150；kcl?4；cacl2?1；mgcl2?1；hepes10；ph7.2至7.4(含naoh)，滲透壓290mosm至330mosm。內(nèi)部溶液含有(以mm為單位)：kcl，10；kf，100；nacl，10；hepes，10；egta，20；ph＝7.0至7.4(含koh)，滲透壓260mosm至300mosm。
318、電生理學(xué)
319、將在至少4個(gè)細(xì)胞中以2個(gè)濃度評(píng)估化合物對(duì)herg?k+電流參數(shù)的影響。
320、使用自動(dòng)化膜片鉗系統(tǒng)384(nanion?technologies?gmbh,germany)進(jìn)行herg測(cè)試。在35℃至37℃的全細(xì)胞配置中使用膜片-電壓-鉗技術(shù)測(cè)量k+電流。
321、將細(xì)胞保持在-80mv的靜止電壓下，并通過(guò)圖1中所示的電壓模式(用于在35℃至37℃引發(fā)向外k+電流的脈沖模式)刺激它們以活化herg通道并向外傳導(dǎo)ikherg電流，刺激頻率為0.1hz(6bpm)
322、數(shù)據(jù)分析
323、在各藥物濃度下記錄ikherg的幅度，并將它們與媒介物對(duì)照值(取為100％)進(jìn)行比較以定義分?jǐn)?shù)阻斷(fractional?block)。濃度-應(yīng)答數(shù)據(jù)用以下關(guān)系進(jìn)行擬合：
324、
325、使用eworkbook套件(id?business?solutions?ltd,uk)，通過(guò)非線(xiàn)性回歸分析來(lái)擬合濃度-應(yīng)答曲線(xiàn)。使用4參數(shù)邏輯模型(擬合＝(a+(b/(1+((x/c)^d))))，其中a＝0并且b＝100)來(lái)完成數(shù)據(jù)擬合。
326、herg測(cè)定的結(jié)果作為herg?ic20總結(jié)于下表2中。
327、跨細(xì)胞p-gp測(cè)定：
328、一般測(cè)定使用過(guò)表達(dá)人或小鼠p-gp的轉(zhuǎn)染llc-pk1細(xì)胞(豬腎上皮細(xì)胞)，在96孔半透濾膜板上培養(yǎng)，其中它們形成具有緊密連接的極化單層，并充當(dāng)頂側(cè)室和基底區(qū)室之間的屏障。
329、p-gp在單層的頂面膜中表達(dá)。
330、分別通過(guò)添加細(xì)胞不可滲透標(biāo)記物熒光黃和參考p-gp底物艾多沙班，來(lái)確認(rèn)細(xì)胞單層的緊密性和p-gp的功能活性。
331、pampa：
332、pampa(平行人工膜滲透性測(cè)定)為針對(duì)候選藥物的第一線(xiàn)滲透性篩選方法。pampa測(cè)定使用人工磷脂膜來(lái)模擬跨細(xì)胞吸收條件。該測(cè)定判定可用于化合物優(yōu)化和排序目的的滲透性值，以及用于計(jì)算機(jī)仿真模型以預(yù)測(cè)腸道吸收的輸入?yún)?shù)。
333、在t-開(kāi)始(參考)處測(cè)量供體濃度，并與一定時(shí)間(t-結(jié)束)后供體和受體濃度進(jìn)行比較，以計(jì)算化合物通過(guò)膜的程度。
334、微粒體穩(wěn)定性：
335、在tecan(tecan?group?ltd,switzerland)自動(dòng)液體處理系統(tǒng)上，在37℃在96孔板中，以微粒體中的1μm測(cè)試化合物(0.5mg/ml)加上輔因子nadph進(jìn)行孵育。在測(cè)試化合物與微粒體預(yù)孵育10分鐘后，通過(guò)添加輔因子開(kāi)始酶反應(yīng)。在第1、3、6、9、15、25、35和45分鐘時(shí)，取出孵育的等分試樣并用含有內(nèi)標(biāo)的1:3(v/v)乙腈淬滅。然后將樣品冷卻并離心，然后通過(guò)lc-ms/ms2分析上清液。
336、肝細(xì)胞中的代謝穩(wěn)定性：
337、測(cè)定描述：
338、生物材料。獲得凍存肝細(xì)胞[小鼠、大鼠、兔、猴和人類(lèi)(男性和女性；混合)]。在整個(gè)研究中，肝細(xì)胞重建(reconstitution)后的活力為至少80％。取得即用型大鼠/人類(lèi)培養(yǎng)物[長(zhǎng)期肝細(xì)胞共培養(yǎng)物；匯集(對(duì)于人類(lèi)，男性n＝5，女性n＝5)]與基質(zhì)小鼠成纖維細(xì)胞(陰性對(duì)照；匯集)以及用于孵育的板、應(yīng)用培養(yǎng)基和維持培養(yǎng)基。
339、通過(guò)懸浮的肝細(xì)胞進(jìn)行的代謝。將初代匯集的凍存肝細(xì)胞在含有10％fcs、0.05mg/ml鏈霉素和50u/ml青霉素和0.4mm?l-谷氨酰胺以及0.01mg/ml慶大霉素、0.048mg/ml氫化可的松和0.004mg/ml胰島素的經(jīng)預(yù)熱的william's?e培養(yǎng)基中重建，使最終懸浮液密度為1×106個(gè)細(xì)胞/ml。用配備帶軌道振蕩器的co2培養(yǎng)箱的液體處理系統(tǒng)(tecan)全自動(dòng)進(jìn)行孵育。將測(cè)試化合物以例如1μm添加至孔(1×105個(gè)細(xì)胞/孔)中后，將96孔肝細(xì)胞懸浮培養(yǎng)板在37℃在5％co2中孵育。通過(guò)在至多2小時(shí)的指定時(shí)間點(diǎn)向孵育孔中添加乙腈(包括內(nèi)標(biāo))來(lái)淬滅樣品。
340、通過(guò)進(jìn)行的代謝。在含有貼壁肝細(xì)胞與小鼠成纖維細(xì)胞對(duì)照細(xì)胞的共培養(yǎng)物或單獨(dú)對(duì)照細(xì)胞的96孔板中進(jìn)行(5％co2氣氛和37℃)如懸浮液測(cè)定中所進(jìn)行的試驗(yàn)品(以例如1μm，0.1％v/v?dmso)的孵育。人類(lèi)中的孵育培養(yǎng)基與懸浮肝細(xì)胞中的培養(yǎng)基相同。在限定的時(shí)間點(diǎn)(2、18、26、48、72和96小時(shí))，用含有內(nèi)標(biāo)的冰冷乙腈淬滅全部的孔。
341、然后適當(dāng)離心樣品，并通過(guò)lc-ms/ms來(lái)分析上清液。孵育以n＝1或2進(jìn)行。
342、表1：nlrp3抑制活性
343、
344、
345、表2：herg抑制測(cè)定
346、