本發(fā)明涉及植物化學(xué)及醫(yī)藥，具體涉及一種從乳漿大戟中分離倍半萜類化合物的方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、大戟屬(euphorbiaceae)包含全球約2000種植物。乳漿大戟(euphorbia?esulal.)屬于大戟科，是一種多年生草本植物，可生長至一定高度。其具有典型外觀特征，葉片呈綠色，植株受傷時會分泌乳白色汁液，因此而得名。該植物廣泛分布于中國多個省份和直轄市，也見于世界其他地區(qū)。在傳統(tǒng)中醫(yī)藥中，乳漿大戟被用于治療多種疾病，包括癌癥、腫脹及疣等。其提取物及部分化合物被認(rèn)為具有抗癌、抗炎和抗菌活性。除藥用外，乳漿大戟還可用于天然殺蟲劑和染料的制備。

2、胡蘿卜烷型倍半萜是一類雙環(huán)倍半萜化合物，其研究進(jìn)展迅速，它們不僅廣泛分布于傘形科植物中，還是綠色木霉中最豐富的代謝產(chǎn)物，較早之前植物化學(xué)和生物學(xué)研究表明，胡蘿卜烷類化合物具有多種藥理活性，包括抗炎、抗腫瘤、抗菌、抗hiv、增殖促進(jìn)、避孕以及對某些海洋浮游生物的抑制作用等。

3、本發(fā)明在乳漿大戟(euphorbia?esula)中分離鑒定出胡蘿卜烷型倍半萜類化合物，其中，化合物式(ⅰ)為新化合物，化合物式(ⅱ)-(ⅵ)為該屬植物首次分離得到，同時，研究表明，這些化合物不僅具有顯著的抗炎活性，還表現(xiàn)出明顯的抗腫瘤活性。因此，對乳漿大戟中的倍半萜類成分進(jìn)行系統(tǒng)的研究，明確其藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，發(fā)現(xiàn)特異活性的倍半萜類化合物，具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的在于，提供一種從乳漿大戟中分離出倍半萜類化合物的方法及應(yīng)用，采用將乳漿大戟地上部分粉碎后在室溫下，用乙醇，提取，減壓蒸干溶劑得到乳漿大戟粗提物浸膏，再將粗提物浸膏用水分散，加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，至有機(jī)相無色，合并有機(jī)相層，減壓蒸干溶劑得到乙酸乙酯萃取物浸膏；再經(jīng)正相硅膠柱、反相c18柱色譜法獲得胡蘿卜烷型倍半萜類化合物式(ⅰ)-(ⅵ)，并對其進(jìn)行抗炎、抗腫瘤活性測定，結(jié)果顯示，所分離得到的胡蘿卜烷型倍半萜類化合物式(ⅰ)-(ⅵ)均具備不同程度的抗炎、抗腫瘤活性，具備用于制備相關(guān)藥物的潛力。

2、本發(fā)明所述的從乳漿大戟中分離得到的倍半萜類化合物，該化合物的結(jié)構(gòu)式為：

3、

4、其中：化合物式(ⅰ)為(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4'-羥基-5'-甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；

5、化合物式(ⅱ)為(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4'-甲氧基-5'-羥基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；

6、化合物式(ⅲ)為(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4',5'-二甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；

7、化合物式(ⅳ)為(1r,4r,5s,6s)-6-對羥基苯甲酰氧基-胡蘿卜-8-烯-4-醇；

8、化合物式(ⅴ)為(1r,4r,5s,6s,8s)-6-對羥基苯甲酰氧基-胡蘿卜-9-烯-4,8-二醇；

9、化合物式(ⅵ)為(1r,4r,5s,6s)-6-(4'-羥基-5'-甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-8-烯-4-醇，具體操作按下列步驟進(jìn)行：

10、a、提?。喊戳弦罕葹?:5將乳漿大戟地上部分粉碎后在室溫下，用濃度80％乙醇，提取5次，濃度70％乙醇，提取3次，每次提取時間24小時，減壓蒸干溶劑得到乳漿大戟粗提物浸膏，再將粗提物浸膏用水分散，加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，至有機(jī)相無色，合并有機(jī)相層，減壓蒸干溶劑得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

11、b、分離：將步驟a得到的乙酸乙酯萃取物浸膏用正相硅膠柱分離，用體積比100:1-0:1的石油醚-乙酸乙酯為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，流分經(jīng)硅膠薄層層析分析，合并相同流分，得到8段組分fr.1-fr.8，將組分第fr.2通過反相c18柱色譜法分離，用體積比10:90-100:0的甲醇-水為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，得到13段組分fr.2-1-fr.2-13，將組分fr.2-9再經(jīng)反相柱c18?5μm150×10mm分離，以體積比45:55的乙腈-水混合溶液為洗脫劑，等度洗脫得到式(ⅰ)化合物(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4'-羥基-5'-甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮和式(ⅱ)化合物(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4'-甲氧基-5'-羥基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；將段組分fr.2-10經(jīng)反相柱c18?5μm?150×10mm分離，以體積比53:47的乙腈-水混合溶液為洗脫劑，等度洗脫得到式(ⅲ)化合物(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4',5'-二甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；將段組分fr.3通過反相c18柱色譜法分離，用體積比10:90-100:0的甲醇-水為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，得到7段組分fr.3-1-fr.3-7，將組分fr.3-5再經(jīng)反相柱c185μm?150×10mm分離，以體積比40:60-100:0的乙腈-水混合溶液為洗脫劑，梯度洗脫得到式(ⅳ)化合物(1r,4r,5s,6s)-6-對羥基苯甲酰氧基-胡蘿卜-8-烯-4-醇；將組分fr.3-4再經(jīng)反相柱c18?5μm?150×10mm分離，以體積比53:47的乙腈-水混合溶液為洗脫劑，等度洗脫得到式(ⅴ)化合物(1r,4r,5s,6s,8s)-6-對羥基苯甲酰氧基-胡蘿卜-9-烯-4,8-二醇和式(ⅵ)化合物(1r,4r,5s,6s)-6-(4'-羥基-5'-甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-8-烯-4-醇。

12、所述方法獲得的從乳漿大戟中分離的倍半萜類化合物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。

13、所述方法獲得的從乳漿大戟中分離的倍半萜類化合物在制備抗腫瘤人宮頸癌細(xì)胞(hela)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(ht-29)、人乳腺癌細(xì)胞(mcf-7)的藥物中的應(yīng)用。

14、本發(fā)明所述的一種從乳漿大戟中分離倍半萜類化合物的方法及應(yīng)用，分離得到的倍半萜類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定：

15、式(ⅰ)化合物(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4'-羥基-5'-甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；為黃色油狀物，經(jīng)(–)-hresims(m/z?401.1975[m-h]–，理論值401.1959)確定其分子式為c23h30o6；根據(jù)1h，13c及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)，骨架類型為胡蘿卜烷型，其1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)歸屬見表1[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶劑：cd3od]；式(ⅱ)化合物(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4'-甲氧基-5'-羥基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；為黃色油狀物，經(jīng)(–)-hresims(m/z?401.1975[m-h]–，理論值401.1959)確定其分子式為c23h30o6；根據(jù)1h，13c及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)，骨架類型為胡蘿卜烷型，其1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)歸屬見表1[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶劑：cd3od]；

16、式(ⅲ)化合物(1r,4r,5s,6s)-4-羥基-6-(4',5'-二甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-7-烯-9-酮；為黃色油狀物，經(jīng)(+)-hresims(m/z?417.2280[m+h]+，理論值417.2272)確定其分子式為c23h32o6；根據(jù)1h，13c及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)，骨架類型為胡蘿卜烷型，其1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)歸屬見表1[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶劑：cd3od]。

17、表1.化合物式(ⅰ)、(ⅱ)、(ⅲ)的1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)

18、

19、

20、式(ⅳ)化合物(1r,4r,5s,6s)-6-對羥基苯甲酰氧基-胡蘿卜-8-烯-4-醇，為黃色油狀物，經(jīng)(–)-hresims(m/z?357.2079[m-h]–，理論值357.2060)確定其分子式為c22h30o4；根據(jù)1h，13c及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)，骨架類型為胡蘿卜烷型，其1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)歸屬見表2[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶劑：cd3od]；

21、式(ⅴ)化合物(1r,4r,5s,6s,8s)-6-對羥基苯甲酰氧基-胡蘿卜-9-烯-4,8-二醇，為淡黃色油狀物，經(jīng)(–)-hresims(m/z?373.2026[m-h]–,理論值373.2010)確定其分子式為c22h30o5；根據(jù)1h，13c及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)，骨架類型為胡蘿卜烷型，其1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)歸屬見表2[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶劑：cd3od]；

22、式(ⅵ)化合物(1r,4r,5s,6s)-6-(4'-羥基-5'-甲氧基苯甲酰氧基)-胡蘿卜-8-烯-4-醇，為淡黃色油狀物，經(jīng)(–)-hresims(m/z?387.2183[m-h]–,理論值387.2166)確定其分子式為c23h32o5；根據(jù)1h，13c及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)，骨架類型為胡蘿卜烷型，其1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)歸屬見表2[600mhz(1h)，150mhz(13c)，溶劑：cd3od]；

23、表2.化合物式(ⅳ)、(ⅴ)、(ⅵ)的1h?nmr和13c?nmr數(shù)據(jù)

24、

25、本發(fā)明所述的從乳漿大戟中分離的倍半萜類化合物在抗炎、抗腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)用是指通過對所分離的倍半萜類化合物抗炎、抗腫瘤活性測定，表現(xiàn)出不同程度的活性，可用于制備抗炎抗、腫瘤相關(guān)藥物。

26、本發(fā)明所述的從乳漿大戟中分離的倍半萜類化合物，目前只可從植物中分離純化得到，暫未發(fā)現(xiàn)通過其余化學(xué)方法獲得。